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貨號 | FS-X10900 |
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中文名稱:HSP90抑制劑(Debio 0932)
英文名稱:Debio 0932
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg
貨號:FS-X10900
產(chǎn)品介紹:
Debio0932(CUDC-305)是HSP90新穎的抑制劑,在很多細胞癌癥中有很強的生物活性和抗增殖能力。(IC50值是220nmol/L) 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:1061318-81-7 別名:CUDC-305 純度:99.44% 分子量:442.58 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
鏈霉菌人EB病IgMAnti-THOC5 Antibody人磷化外信號調(diào)節(jié)激(pERK)
陰溝腸桿菌大鼠抵抗Anti-THRA Antibody人受磷蛋白(PLN)
釀酒酵母人EB病IgAAnti-THOC5 Antibody人受磷蛋白(PLN)
血鏈球菌大鼠催乳Anti-THRB Antibody人腫瘤壞死因子相關弱凋亡誘導因子(TWEAK)
短裙竹蓀2-1大鼠促生長激釋放激Anti-TIE1 Antibody人腫瘤壞死因子相關弱凋亡誘導因子(TWEAK)
腫大地桿菌人EB病IgGAnti-TIF-IA Antibody人IPO-38蛋白(IPO38)
白色念珠菌人利什曼原蟲抗體Anti-TIGD3 Antibody人IPO-38蛋白(IPO38)
茶盤長孢*大鼠促腎上腺皮質激Anti-TIMP3 Antibody人切除修復交叉互補基因1(ERCC1)
雜色曲霉大鼠促卵泡Anti-TK Antibody人切除修復交叉互補基因1(ERCC1)
寡鞘單胞菌人登革熱抗體Anti-TKFC Antibody人羰基化蛋白(PC)
梭狀芽孢桿菌人流感病抗體IgGAnti-TK1 Antibody人羰基化蛋白(PC)
微小桿菌大鼠雌二受體Anti-TKFC Antibody人磷化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)
閆遜初氏菌人腺病IgMAnti-TLE2 Antibody人磷化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)
釀酒酵母大鼠前心鈉肽Anti-TLE1 Antibody人樁蛋白(Pax)
大腸埃希氏桿菌大鼠大內(nèi)皮Anti-TLE4 Antibody人樁蛋白(Pax)
墳墓節(jié)桿菌人腺病IgGAnti-TLK1 Antibody人小表皮粘蛋白(SBEM)
葡萄膜自身抗原Uaca抗體鐮孢霉抗人TNFRII小鼠7
肌營養(yǎng)不良蛋白相關蛋白1抗體擬莖點霉(斜面)抗人IgE小鼠7
神經(jīng)突起誘導因子受體UNC5B抗體淡紅側耳抗肝細胞生長因子(HGF)7
神經(jīng)突起生長誘導因子受體UNC5B抗體交鏈孢霉抗副甲型沙門氏菌單克抗體7株
HSP90抑制劑(Debio 0932)巴斯德畢赤酵母 黃腐植直接低密度脂蛋白膽固
異配囊接霉卵孢變種 鉻、銅、鈉/Cr, Cu, Na大腸桿病
松口蘑 鎘、汞、鉛/Cd, Hg, Pb頂體
銅綠假單胞 多配體蛋白聚糖1
蠟狀芽孢桿 鋇、鈣、鍶/Ba, Ca, Sr硫乙酰肝
香菇 、磷、鋯/B, P, Zr心肌型肌激同工MB
側雄腐霉 鹽納洛酮乙型腦炎病IgG抗體
黃微綠鏈霉 金、鉑、銠/Au, Pt, Rh游離膽固
伊平屋橋大洋芽孢桿 鋁、鐵、鋅/Al, Fe, Zn支鏈氨基
耐久腸球 鹽納洛酮成纖維生長因子21
金針菇 鋰、鈉、、/Li, Na, K, NH4饑餓
土地桿 N-乙酰-D-半乳糖α淀粉
無環(huán)田頭菇 鋰、鈉、、/Li, Na, K, NH4過氧化物
殺結核鏈霉 鑭、鈰、釤、釔/La, Ce, Sm, Y髓過氧化物
松口蘑 3--L-酪總膽紅
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