脂肪酸合成酶FASN有效抑制劑（C75 trans）-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X10983

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：脂肪酸合成酶FASN有效抑制劑（C75 trans）

英文名稱：C75 trans

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg

貨號：FS-X10983

產(chǎn)品介紹:

C75trans是C75的trans形式，C75是脂肪酸合成酶FASN有效抑制劑。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：191282-48-1

別名：C 75 trC-75 trans-racemic;trans-C75

純度：99.86%

分子量：254.32

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

多黏類芽孢桿菌Escherichia coli大鼠血小板生成(TPO)

康寧木霉Escherichia coli大鼠可溶性凋亡相關(guān)因子(sFAS/Apo-1)

Paenibacillus agarexedensEscherichia coli大鼠可溶性凋亡相關(guān)因子(sFAS/Apo-1)

產(chǎn)氣莢膜梭菌 C型Escherichia coli大鼠Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)

桔青霉Escherichia coli大鼠Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)

菌種中心生活飲用水總大腸菌群質(zhì)控樣品（多管發(fā)酵法）Escherichia coli大鼠甘露糖結(jié)合蛋白/甘露糖結(jié)合凝集(MBP/MBL)

樟疫霉Escherichia coli大鼠甘露糖結(jié)合蛋白/甘露糖結(jié)合凝集(MBP/MBL)

蘇云金芽孢桿菌Escherichia coli大鼠白介7(IL-7)

雅致放射毛霉Escherichia coli大鼠白介7(IL-7)

裂褶菌Escherichia coli大鼠絲/蘇蛋白磷(STK)

魯考弗美奇酵母Escherichia coli大鼠絲/蘇蛋白磷(STK)

類諾卡氏菌Escherichia coli大鼠抗紅抗體(RBC)

動球菌Escherichia coli大鼠抗紅抗體(RBC)

巴斯德畢赤酵母Escherichia coli大鼠CD3分子(CD3)

孢小克銀漢霉輪生變種Escherichia coli大鼠CD3分子(CD3)

蘇云金芽孢桿菌云南亞種Escherichia coli大鼠c-Jun基末端激(JNK)

富含亮重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體雜色尾孢草魚腎細(xì)胞

孤兒核受體TAK1抗體貝倫格葡萄座腔菌大鼠脊髓背角神經(jīng)細(xì)胞

核仁磷蛋白抗體北方蜜環(huán)菌人腎皮質(zhì)曲小管上皮細(xì)胞

嗜中性粒細(xì)胞胞漿因子4抗體粉紅聚端孢霉PG13 逆轉(zhuǎn)錄病毒包被的TK-NIH3T3細(xì)胞
脂肪酸合成酶FASN有效抑制劑（C75 trans）猴頭 -3-烯甲酯氫-ATP

皺褶假絲酵母紫樹甙氫-ATP

卷緣齒白變種靈芝DM鈣-ATP

黑曲霉異內(nèi)酯鈉-鈣交換蛋白

真姬菇 9-甲氧基離子；碳?xì)涓x子交換蛋白

棒狀乳桿扭曲亞種 4-羥基異亮抗肽

大腸桿木蝴蝶A黃體生成

鏈霉 (24Z)-3,4-開環(huán)甘遂-4(28),7,24-三烯-3,26-二

大腸桿 Thunberginol C

嗜線蟲致病桿脫氫芳樟

耐久腸球蓮心堿高鹽

黑木耳原花青C1

根瘤原花青B3

中慢生華癸根瘤丹參

暗孢節(jié)菱孢知母皂B
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)