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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> SYK和JAK酶抑制劑(Cerdulatinib)
貨號(hào) | FS-X10651 |
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中文名稱(chēng):SYK和JAK酶抑制劑(Cerdulatinib)
英文名稱(chēng):Cerdulatinib
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg
貨號(hào):FS-X10651
產(chǎn)品介紹:
Cerdulatinib是一種高效、可,ATP競(jìng)爭(zhēng)性的SYK和JAK酶抑制劑,對(duì)SYK和JAKs的IC50值分別為32nM和0.5-12nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1198300-79-6 別名:PRT062070;PRT2070 純度:97.44% 分子量:445.54 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
山茶羅丹明標(biāo)記的兔抗人IgGAnti-TRPC5 Antibody多肽-N-乙?;肴樘寝D(zhuǎn)移1(GALNT1)
杭州弧菌膠體金標(biāo)記的兔抗人IgGAnti-TRPC6 Antibody多配體蛋白聚糖4(SDC4)
赫黃菌核鏈霉菌堿性磷(AP)標(biāo)記的兔抗人IgGAnti-TRPM1 Antibody多配體蛋白聚糖3(SDC3)
乳粉 克羅諾桿菌屬(阪崎腸桿菌)(陰性) PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗人IgGAnti-TRPC6 Antibody多配體蛋白聚糖1(SDC1)
釀酒酵母PE-Cy7標(biāo)記的兔抗人IgGAnti-TRPC7 Antibody多聚免疫球蛋白受體(PIGR)
蟬擬青霉APC標(biāo)記的兔抗人IgGAnti-TRPM5 Antibody(PB0949)多聚蛋白2(MMRN2)
串珠鐮孢菌Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗人IgGAnti-TRPM7 Antibody多聚蛋白1(MMRN1)
圓弧青霉Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗人IgGAnti-TRPM4 Antibody(PB0948)多聚A特異性核糖核(PARN)
微紫青霉Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗人IgGAnti-TRPM8 Antibody多聚ADP核糖聚合4(PARP4)
糙梗青霉Cy3標(biāo)記的兔抗人IgGAnti-TRPV1 Antibody多核糖核核轉(zhuǎn)移1(PNPT1)
大腸埃希氏菌Cy5標(biāo)記的兔抗人IgGAnti-TRPV1 Antibody多功能肽2(LMP2)
巴斯德畢赤酵母PE標(biāo)記的兔抗人IgGAnti-TRPV2 Antibody多巴脫羧(DDC)
釀酒酵母PE-Cy3標(biāo)記的兔抗人IgGAnti-TRPV3 Antibody多巴轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(DAT)
奧默畢赤酵母Cy5.5標(biāo)記的兔抗人IgGAnti-TRPV3 Antibody多巴受體D5(DRD5)
毛霉?fàn)罹砻?/span>Cy7標(biāo)記的兔抗人IgGAnti-TRPV3 Antibody多巴受體D4(DRD4)
釀酒酵母羅丹明標(biāo)記的兔抗人IgMAnti-TRPV4 Antibody多巴受體D3(DRD3)
乙胺甲基轉(zhuǎn)移抗體屎腸球菌小鼠主動(dòng)脈組織提取物
前列腺F2a/PGF2α抗體具核梭桿菌多形亞種小鼠腸微血管組織提取物
細(xì)胞骨架蛋白C端PDLIM1抗體脆弱擬桿菌小鼠血管組織提取物
磷二酯5A抗體齒雙歧桿菌小鼠心肌組織提取物
SYK和JAK酶抑制劑(Cerdulatinib)細(xì)孢毛霉 聚乙烯亞C-反應(yīng)蛋白
釀酒酵母 DL-乙硫D-乳鹽
棘青霉 嗎啉乙磺(無(wú)水)α1性糖蛋白
產(chǎn)氣莢膜梭 C型 植物凝膠αS1酪蛋白
異配囊接霉 4-基-β-D-纖維二糖αS2酪蛋白
釀酒酵母 3-甲基腺α半乳糖
微白黃鏈霉 內(nèi)酯α干擾
產(chǎn)氣莢膜梭 D型 黃-5'-單磷鈉α酪蛋白
里氏木霉 辛癸甘油酯β淀粉樣蛋白1-40
紫色鏈霉 單硬脂鋁β淀粉樣蛋白1-42
多量毛霉 亞油甲酯β干擾
構(gòu)巢曲霉 雌酮β-肌動(dòng)蛋白
枯草芽孢桿 5-甲基糠β酪蛋白
嗜麥芽黃單胞 磷氫二鈉,二水β-羥基丁
被孢屬 6-溴吡啶-3-β-羥基丁
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