HDAC抑制劑(RG2833)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10861

產(chǎn)品介紹:

RG2833是一種大腦滲透的HDAC抑制劑，抑制HDAC1和HDAC3的活性，IC50值分別為60nM和50nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1215493-56-3

別名：RGFP109

純度：99.43%

分子量：339.43

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

中文名稱：HDAC抑制劑(RG2833)

英文名稱：RG2833

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10861

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

芽胞桿菌小鼠α半乳糖基抗原Anti-RAB29 Antibody人蛋白S(Protein S)

郝氏青霉大鼠胃腸癌標志物CA199Anti-RAB2B Antibody人蛋白S(Protein S)

福山假絲酵母人幽門螺旋桿菌IgMAnti-RAB31 Antibody人可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體(sEPCR)

蟲草大鼠血紅氧合1Anti-RAB29 Antibody人可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體(sEPCR)

惡臭假單胞菌小鼠β基己糖AAnti-RAB33A Antibody人CCAAT增強子結(jié)合蛋白ε(C/EBPε)

人相關(guān)蛋白AAnti-RAB35 Antibody人CCAAT增強子結(jié)合蛋白ε(C/EBPε)

頂頭孢霉大鼠磷脂A2Anti-RAB34 Antibody人CCAAT增強子結(jié)合蛋白δ(C/EBPδ)

白絨紅蛋巢菌小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白AAnti-RAB37 Antibody人CCAAT增強子結(jié)合蛋白δ(C/EBPδ)

焦曲霉小鼠克拉拉蛋白Anti-RAB38 Antibody人CCAAT增強子結(jié)合蛋白α(C/EBPα)

總狀共頭霉大鼠組織因子途徑抑制物Anti-RAB40B Antibody人CCAAT增強子結(jié)合蛋白α(C/EBPα)

耐輻射奇球菌人胃抑Anti-RAB3GAP2 Antibody人2,3-二磷甘油(2,3-DPG)

散囊菌小鼠β半乳糖Anti-RAB3GAP2 Antibody人2,3-二磷甘油(2,3-DPG)

煙曲霉大鼠水通道蛋白5Anti-RAB3GAP1 Antibody人基膜聚糖/內(nèi)腔蛋白(LUM)

釀酒酵母人胃泌釋放多肽Anti-RAB3IP Antibody人基膜聚糖/內(nèi)腔蛋白(LUM)

光滑青霉人胃泌釋放肽前體Anti-RAB41 Antibody人Na+/H+交換體3(NHE3)

茯苓小鼠腎上腺Anti-RAB40B Antibody人Na+/H+交換體3(NHE3)

跨膜蛋白6B抗體美國大鐘菇人膀胱移行細胞乳頭瘤細胞

腫瘤壞死因子誘導蛋白3相互作用蛋白1抗體青黃褐硬皮馬勃pCDNA3.1-his-TNFRSF4

瞬時受體電位通道蛋白4抗體地星TNFRSF4人源基因

神經(jīng)元蛋白22抗體褐疣柄牛肝菌人小細胞肺癌細胞
HDAC抑制劑(RG2833)粉擬青霉 (S)-(-)-2-甲基-1-丁三葉因子

黑曲霉 3%NaCl阿拉伯糖主要組織相容性復合體Ⅱ類

果蔬汁莠滅凈、嘧霉、乙酰磷、多靈、死蜱、菊酯 3%NaCl胰胨水中性粒明膠相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白

網(wǎng)狀鐮孢 3%NaCl甘露氨肽N

枯草芽孢桿枯草亞種 9-溴蒽二肽基肽Ⅳ

*松乳菇 3%NaCl蔗糖γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽

蟲花棒束孢 3%NaCl阿拉伯糖氨肽A

乳乳球乳亞種 3%NaCl乳糖尿氮

華特拉根瘤 [1,3-雙(二苯基膦)烷]二化鎳(II)腸三葉因子

枯草芽孢桿 %NaCl胰胨水Na-K-ATP

Rhizobium miluonense 7%NaCl胰胨水層粘連蛋白

球座尾孢無鹽胰胨水Ⅳ型膠原

腸膜明串珠麥芽糖維生B12

釀酒酵母 1-溴-2,3,5,6-四氟苯口蹄疫病非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體

柄籃狀葡萄糖二肽基肽Ⅳ

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