MEK抑制劑(Refametinib)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10968

中文名稱：MEK抑制劑(Refametinib)

英文名稱：Refametinib

產品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10968

產品介紹:

Refametinib(RDEA119,BAY86-9766)是MEK抑制劑，對MEK1和MEK2的IC50分別為19nM和47nM，有抗腫瘤活性。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：923032-37-5

別名：BAY 869766;BAY 86-97661;RDEA119

純度：98.46%

分子量：572.34

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

美麗鹽單胞菌人鈣網蛋白Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠催乳(PRL)

帚狀曲霉人網膜Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠抵抗(Resistin)

礦泉水大腸菌群人基質γ羧基谷蛋白Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠抵抗(Resistin)

絲球霉屬人基質裂解蛋白/基質溶Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠乙酰受體抗體(AChRab)

局限青霉人螺旋肽Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠乙酰受體抗體(AChRab)

首爾紅色桿菌人溶體相關膜蛋白2Bacillus thuringiensis subsp. israelensis小鼠骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)

支氣管敗血波氏菌人軟骨糖蛋白39Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)

節(jié)桿菌人不透光相關蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kenyae小鼠γ基丁(GABA)

大腸埃希菌人鞭毛蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kenyae小鼠γ基丁(GABA)

柱狀假絲酵母人多聚血清蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kenyae小鼠5羥色(5-HT)

根霉人胞漿免疫球蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kenyae小鼠5羥色(5-HT)

大豆慢生根瘤菌人纖維介蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kenyae小鼠P物質受體(SP-R)

嗜嗜熱雙歧桿菌豬亞種人泛蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki小鼠P物質受體(SP-R)

草螺菌人類粘蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki小鼠P物質(SP)

釀酒酵母人彈性蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki小鼠P物質(SP)

孟氏假單胞菌人套膜蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki小鼠血管活性腸肽(VIP)

離子通道蛋白27抗體桂花耳COC1細胞耐藥亞株

跨膜受體蛋白Notch-2抗體冷杉囊孔菌昆蟲卵巢細胞

生殖細胞增殖相關蛋白NANOS2抗體小鱗毛銹傘貓星形腦膠質細胞

親核β1抗體粉色小菇牛陀螺狀細胞
MEK抑制劑(Refametinib)煙曲霉 Tanshinlactone過氧化物體增殖物激活受體α2

球孢白僵 Noreugenin甘油二酯O-酰基轉移

根瘤 Pinostilbenoside周期Ⅰ

異常威克漢姆酵母 ConfluentinAurora激A

根霉屬 Norcepharadione B分裂周期因子20

果生鏈核盤 Carpachromene周期B1

釀酒酵母 Penduletin分裂周期因子2

雞腿菇 SteppogeninMyc原癌基因蛋白

相思根瘤 Hinokiol內啡肽

糙皮側耳 Canadine諾達病

糞腸球 Friedelanol纖維

費氏中華根瘤（未復核） Oleuropeic acid補體1q

大禿馬勃 Lecanoric acid精蛋白1

釀酒酵母 Dihydrophaseic acid核因子κB

假單孢 Lacinilene C三磷腺檸檬裂解

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