讓您在實(shí)驗(yàn)中提高ELISA試劑盒靈敏度的方法

1、包被液稀釋的抗原（4、8、16、32、64、128ng/ml），用移液器小心將抗原液100μl加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可產(chǎn)生氣泡。每個濃度加4孔（4個復(fù)孔），對照孔4孔加入相同體積的包被液；其中兩孔加入100μl樣本。用保鮮膜包好酶標(biāo)板，將酶標(biāo)板放入底部墊有濕砂布的鋁盒中，放入4℃中包被過夜。
2、洗滌：將酶標(biāo)板孔中的包被液傾干凈，并反扣在干凈的吸水紙上拍干，加入洗滌液洗滌進(jìn)行洗滌。采用浸泡式洗滌法，將洗滌液注滿板孔，放置3min，間歇搖動，浸泡時間不隨意縮短，吸干孔內(nèi)洗滌液，也可甩去洗滌液，反扣在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌4次。
3、封閉：在酶標(biāo)板孔的底部加入封閉液200μl，室溫下封閉1h。
4、1h后將酶標(biāo)板孔中的封閉液傾倒干凈，并反扣在干凈的吸水紙上拍干，然后每孔中加入一抗使用液100μl，注意將抗體液加在酶標(biāo)板孔的底部，避免加在孔壁上部。用保鮮膜包好酶標(biāo)板，將酶標(biāo)板放入底部墊有濕砂布的鋁盒中，并在鋁盒中放一裝有少量水的燒杯，在37℃溫箱中放置2h。
5、2h后取出酶標(biāo)板，傾倒干凈酶標(biāo)板孔中的一抗溶液，并反扣在干凈的吸水紙上拍干。洗滌4次，洗滌方法同2。
6、在酶標(biāo)板孔中加入梅標(biāo)二抗1:4000倍稀釋的溶液100μl，加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可產(chǎn)生氣泡。用保鮮膜包好酶標(biāo)板，將其放入底部墊有濕砂布的鋁盒中，并在鋁盒中放一裝有少量水的燒杯，在37℃溫箱中放置1h。
7、取出酶標(biāo)板，傾倒干凈孔中的二抗溶液，并反扣在干凈的吸水紙上拍干，按2洗滌方法洗滌4次。
8、在酶標(biāo)板每孔中加入底物A液50μl，底物B液50μl，反應(yīng)15min～20min后，在每孔中加入反應(yīng)中止液50μl，在中止反應(yīng)后15min時在酶標(biāo)儀上于450nm處測定OD值。