線粒體活性氧產生速率(ROS)測試盒熒光法-上海邦景實業(yè)有限公司

貨號	BJ-0161151-1

產品簡介：

產品名稱：線粒體活性氧產生速率(ROS)測試盒熒光法
規(guī)格：100管/96樣
貨號：BJ-0161151-1

檢測方法：熒光法

產品分類：氧化與抗氧化系列

貯存溫度：2～8℃。

本試劑盒保質期：6個月

商品介紹：

測定意義：

活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產物過氧化物和羥化物等，研究表明，機體95％以上的活性氧(ROS)都來自于線粒體，其失衡所致的氧化應激與細胞生長增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程有關。

正常情況下，細胞內抗氧化防御系統(tǒng)與氧自由基處于平衡狀態(tài)，細胞內活性氧(ROS)水平維持在較低的生理范圍；在病理情況下，細胞內抗氧化系統(tǒng)與氧自由基的平衡被打破，細胞內活性氧水平過多，就可破壞線粒體酶類、脂類和核酸，使機體出現(xiàn)氧化應激，同時，活性氧還可攻擊線粒體DNA產生氧化損傷，導致線粒體ATP合成減少、線粒體膜電位破壞等結構和功能變化。

因此，通過檢測活性氧的變化來判斷線粒體的功能是否正常具有重要意義。

測定原理：

熒光探針-還原型二氯熒光素 (2', 7'-dichlorodihy drofluorescin diacetate, DCFH-DA)可擴散通過線粒體膜，在線粒體內被酯酶水解，形成無熒光的DCFH，DCFH迅速與ROS反應生成熒光物—氧化型二氯熒光素(2', 7'-dichlo rofluorescin, DCF)。根據(jù)上述原理設計了利用熒光法直接定量檢測線粒體ROS產生速率的方法。將熒光強度隨時間變化的數(shù)據(jù)點擬合，線性回歸直線斜率與ROS產生的速率呈正比。

需自備的儀器和用品：

多功能酶標儀、恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調式移液器、冰、蒸餾水。

操作步驟:

本產品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。

1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內配制），酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

4. 每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

促黃體激su誘導蛋白5抗體山性膠電泳液 ,10×250mL規(guī)格

T淋巴激活蛋白抗體大腸埃希菌去離子甲酰100mL

磷酸化S6核糖體蛋白抗體盤多毛孢屬溴化乙錠清除劑100 次規(guī)格

磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體食砜節(jié)桿菌dNTP 溶液（標記）0.5mL規(guī)格

磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體松生莖點霉硫酸葡聚糖1g規(guī)格

磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體煙管菌一站式 DNA 非變性 PAGE 電泳套裝30 次

糖皮質激su調節(jié)激酶1抗體大腸埃希氏菌超快核酸電泳液干粉 50L

磷酸化磷酯酶Cβ3抗體果生鏈核盤菌miRNA 尿su -PAGE 上樣液 ,6×10mL

磷酸化染色體結構維持蛋白質１抗體大腸埃希氏菌(大腸桿菌)DNA 電泳分子量標準（100-600 bp）50 次規(guī)格

依賴鈉鈣交換蛋白6抗體弗氏假絲酵母4mL DNA 離心超濾管（90-150 KD）1個

相關抗原17抗體耶特鏈霉菌Fluorescein-12-dUTP 溶液，1mM25μL

磷酸化多配體聚糖4(Ser179)抗體根瘤菌屬一站式 DNA 尿su -PAGE 電泳套裝30 次

基質衍生因子1抗體糖化酵母TAE 電泳液 ,50×2500mL

SET結合蛋白1抗體類干酪乳桿菌RNA 電泳液 ,10×100mL

生長抑su受體3抗體扶桑本森頓酵母TBE 電泳液 ,10×250mL
線粒體活性氧產生速率(ROS)測試盒熒光法肌球蛋白重鏈9(MYH9)試劑盒 Anti-EYA4 Antibody磷酸化核糖體S6激酶RSK2

Bcl-2相關X蛋白(BAX)試劑盒 Anti-EXO1 Antibody磷酸化核糖體S6激酶RSK2

多巴受體D3(D3R/DRD3)試劑盒Anti-ETV6 Antibody磷酸化原癌基因c-Raf

腫瘤壞死因子受體超家族成員1A(TNFRSF1A)試劑盒Anti-EWSR1 Antibody磷酸化原癌基因c-Raf

肝配蛋白A1 (EFNA1)試劑盒Anti-EVA1A Antibody磷酸化原癌基因c-Raf

金屬硫蛋白3 (MT3)試劑盒Anti-EZH2 Antibody磷酸化視網膜母瘤相關蛋白1

雌受體β(ERβ)試劑盒 Anti-F2 Antibody磷酸化視網膜母瘤相關蛋白1
特點:

(1)應用廣泛

由于各種各樣的無機物和有機物在紫外可見區(qū)都有吸收,因此均可借此法加以測定。到目前為止,幾乎化學元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。

(2)靈敏度高

由于相應學科的發(fā)展,使新的有機顯色劑的合成和研究取得可喜的進展,從而對元素測定的靈敏度大大提高了一步。特別是由于多元絡合物和各種表面活性劑的應用研究,使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來的幾萬提高到幾十萬。相對于其它痕量分析方法而言,光度法的精密度和準確度一致*是比較高的。不但在實際工作中光度法被廣泛采用,在標準參考物質的研制中,它更受重視,很多光度分析法已制定成為標準方法。

(3)選擇性好

目前已有些元素只要利用控制適當?shù)娘@色條件就可直接進行光度法測定,如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測定,已有比較滿意的方法了。

(4)準確度高

對于一般的分光光度法來說,其濃度測量的相對誤差在1-3%范圍內,如采用示差分光度法測量,則誤差往往可減少到千分之幾。

(5)適用濃度范圍廣

可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經預富集后)。

(6)分析成本低、操作簡便、快速