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規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013533 |
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品牌 | YSRIBIO |
服務流程:
公司產品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結果交付——售后服務。
產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
恙蟲病東方體PCR試劑盒 | 50次 | YS-P013533 |
PCR反應鑒定——PCR反應條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。
豬泛素連接酶E3A (UBE3A) 3-磺炳十六烷二甜菜堿G蛋白偶聯(lián)受體21抗體
豬CCAAT增強子結合蛋白γ(C/EBPγ) 聚氧烯月桂(Brij-35);Brij™ L23G蛋白偶聯(lián)受體22抗體
豬泛素分解酶(DUB) 十二烷硫酸鋰G蛋白偶聯(lián)受體25抗體
豬過氧化還原酶5(PRDX5)諾納德® P-40G蛋白偶聯(lián)受體26抗體
豬核孔蛋白133kda(NUP133)硫代甜菜堿 8G蛋白偶聯(lián)受體27抗體
豬中性粒堿性磷酸酶(NAP)硫代甜菜堿 10G蛋白偶聯(lián)受體3抗體
豬嗜酸粒趨化因子(ECF/CCL11)硫代甜菜堿 12G蛋白偶聯(lián)受體31抗體
豬脂蛋白脂酶(LPL)恩他卡朋;COMT抑制劑G蛋白偶聯(lián)受體32抗體
豬質金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1)曲拉通X-114G蛋白偶聯(lián)受體34抗體
豬核孔蛋白50kda(NUP50)曲拉通X-405G蛋白偶聯(lián)受體35抗體
豬生長因子受體結合蛋白7(Grb7)異硫酸胍G蛋白偶聯(lián)受體37/帕金森相關內皮素受體樣受體抗體
豬血小板因子3(PF3)CHAPS;3-[3-(膽酰)二氨]-1-磺酸G蛋白偶聯(lián)受體40抗體
豬集蛋白亞家族成員11(COLEC11) CHAPSO;3-[(3-膽固氨)二氨]-2-羥-1-磺酸G蛋白偶聯(lián)受體43抗體
豬腺苷三磷酸結合盒轉運體G1(ABCG1) 二硫赤蘚(DTE);1,4-二硫代赤蘚G蛋白偶聯(lián)受體44抗體
豬β葡萄糖酸酶(GUSβ) N-硝-L-精氨酸酯G蛋白偶聯(lián)受體45抗體
豬血小板親和蛋白1(PKP1)N-酰-L-酪氨酸酯(BTEE)同源盒蛋白GSC抗體
恙蟲病東方體PCR試劑盒RASSF1A Ras相關區(qū)域家族1A抗體單組份卡爾費休試劑(測酮類樣 5ml,測水量較高樣品
Pan-ras Pan ras抗體單組份卡爾費休試劑(測酮類樣 2ml,測水量較小樣品
RCC1 染色體濃縮調控蛋白1抗體單組份卡爾費休試劑(測酮類樣 1mg,測水量微小樣品
Phospho-RCC1 (Ser11) 磷酸化染色體濃縮調控蛋白1抗體單組份含吡啶卡爾費休滴定劑 水/ml,測水量較高樣品
Rb/RB1 protein 視網膜母瘤相關蛋白1抗體單組份含吡啶卡爾費休滴定劑 2/ml,測含水量較低樣品
Phospho-Rb (Ser608) 磷酸化視網膜母瘤相關蛋白1抗體單組份含吡啶卡爾費休滴定劑 1ml,測含水量微小樣品
Phospho-Rb (Ser780) 磷酸化視網膜母瘤相關蛋白1抗體單組份滴定用溶劑(不含) 水分≤0.01%,用作反應介質
Phospho-Rb (Ser807/Ser811) 磷酸化視網膜母瘤相關蛋白1抗體單組份油類測定用溶劑 水分≤0.01%,測礦物油
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
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