組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）

2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液：1×20ml。

4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。

5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
服務(wù)流程：

公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；

②堿基配對(duì)原則；

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測(cè)中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。

(3) 簡(jiǎn)便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無(wú)放射性污染、易推廣。

(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

反應(yīng)五要素：

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：

①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。

引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

綿羊5核苷酸酶(5-NT)  軸索過(guò)度生長(zhǎng)抑制因子-B/A抗原

綿羊蛋白激酶Cα相互作用蛋白α1(PICK1)一氧化氮合成酶-2多肽抗原

綿羊腫瘤蛋白p63(TP63)跨膜受體蛋白Notch-1抗原

綿羊α1-B-糖蛋白(α1BG)還原型輔酶Ⅱ抗原

綿羊生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43(GAP43) 促尿鈉排泄肽前體C抗原

綿羊突觸素(SYP)神經(jīng)肽Y受體2（多肽）

綿羊肌酸激酶同工酶MB(CKMB) 神經(jīng)肽Y1受體抗原

綿羊單核趨化蛋白3(MCP-3)醌氧化還原酶抗原

綿羊凝血酶/抗凝血酶復(fù)合物(TAT)谷氨酸受體1（多肽）

綿羊Salusin α蛋白(Salusin α) 谷氨酸受體1抗原

綿羊環(huán)氧合酶-2受體(COX-2R) 谷氨酸受體1

綿羊β-微管蛋白(TUBβ)谷氨酸受體2C（多肽）

綿羊血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140) 原癌因抗原

綿羊酮酸激酶M2型同工酶(PKM2)核因子2相關(guān)因子2抗原

綿羊松弛素/胰島素樣肽受體1(RXFP1)核呼吸因子-1抗原

綿羊角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)  鈉離子/?；悄懰峁厕D(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗原
解脲脲原體檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）M2-PK ( pyruvate Kinase M2)  酮酸激酶-M2（抗原）二氧化錳 AR,85%

M2-PK ( pyruvate Kinase M2 )  酮酸激酶-M2（抗原）金屬錳片  99.9% metals basis,不規(guī)則片狀

p-Arhgef2/GEF-H1(Rho guanine nucleotide exchange factor 2,pSer810)  磷酸化Rho鳥(niǎo)苷酸交換因子2抗原錳粉 99.99% metals basis,粉末

Melan-A/MART-1  黑色素-A（抗原）錳粉 99.9% metals basis,粉末

ARIP2a(Activin receptor 2A)  激活素受體2A/激活素受體相互作用蛋白2a抗原FRASER增菌液 BR

Beta-arrestin 1/2(beta-arrestin 1/2)  β-抑制蛋白1/2抗原硅微粉 AR

ARIP2B(Activin receptor 2B)  激活素受體2B/激活素受體相互作用蛋白2b抗體積雪草酸  98%

MTR-1A (Melatonin receptor-1A)  褪黑素受體（抗原）左旋多巴 99%