參數(shù)規(guī)格：
產品名稱：胎兒三毛滴蟲染料法熒光定量PCR試劑盒
產品貨號：YS-P013701

產品規(guī)格：50次

產品分類：PCR檢測試劑盒

產品運輸：低溫運輸

產品保存：-20℃保存

產品有效期：一年

產品特點：本產品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產品。

實驗過程：

一、試劑準備

1. DNA模板

2．公司產品僅用于科研對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步驟

1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer             5μl

dNTP mixl                 4μl

引物1（10pM）               2μl

引物2（10PM）              2μl

Taq酶（2U/μl）            1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

加ddH2O至               50 μl

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。

3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點優(yōu)勢：

1.   特異性：所有產品使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析，經過TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。

2.   重現(xiàn)性：該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。

3.   靈敏性：該系列產品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。

4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。

5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除TIANDZ公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。

6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。

猴黑素瘤抑制性活性蛋白1(MIA1)  奧巴克拉磺酸鹽染色體及有絲分裂蛋白MIS12抗體

猴中性粒彈性蛋白酶(NE/ELA2)  羊藿素(標準品)單羧酸轉運蛋白-1抗體

猴超氧化物歧化酶1(SOD1)銀杏內酯A(標準品)線粒體核糖體蛋白L11抗體

猴絲氨酸蛋白酶12(PRSS12)銀杏內酯B(標準品)促血管平滑肌分化因子抗體

猴破骨激因子1 (OSF)銀杏內酯C(標準品)跨膜結構域4亞家族成員2抗體

猴蛋白激酶抑制劑γ(PKIγ)銀杏內酯J(標準品)磷酸化致癌因C-Myc抗體

猴甘露糖凝集素受體(MBLR) 隱丹參酮(標準品)肌收縮蛋白MYOT抗體

猴血小板衍生生長因子受體樣蛋白(PDGFRL)隱丹參酮磷酸化絲裂原活化蛋白激酶MAP4K4抗體

猴B活化因子 (BAFF/CD257/TNFSF13B) ?；蛆Z去氧膽酸(標準品)環(huán)指蛋白59抗體

猴胸腺表達趨化因子(TECK/CCL25) 隱綠原酸(標準品)磷酸化絲裂原活化蛋白激酶MAP4K4抗體

猴載脂蛋白A1(ApoA1) 印（標準品）羥戊酸激酶抗體

猴大腦脂肪酸結合蛋白7(FABP7)鷹嘴豆芽素A(標準品)羥戊酸脫羧酶抗體

猴血小板衍生生長因子受體β(PDGFRβ)鷹嘴豆芽素A胞漿蘋果酸酶1抗體

猴抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA) 柚皮苷,川陳皮素組織相容性復合體蛋白1抗體

猴α2抗纖溶酶(α2-AP) 羽扇豆（標準品）微絲相關蛋白3樣抗體

猴叉頭框蛋白O4(FOXO4)鳶尾苷(標準品)微粒體甘油三酯轉運蛋白
胎兒三毛滴蟲染料法熒光定量PCR試劑盒COX/FITC  熒光素標記色素c氧化酶抗體IgG2,7-二溴芴酮 96%

COX-1/FITC  熒光素標記前列腺素氧化環(huán)化酶1抗體IgG雙(三膦)二氯化鈀(Ⅱ) Pd 15.2%

COX-2/FITC  熒光素標記前列腺素氧化環(huán)化酶2抗體IgG1,2-二(二膦)烷二氯化鈀(II)  Pd  18.5%

COX4I1/FITC  熒光素標記色素c氧化酶IV亞型1抗體IgG9,9-二氧雜蒽 97%

COX7A2/FITC  熒光素標記色素c氧化酶COX7A2抗體IgG二茂鐵 98%

C-PC /FITC  熒光素標記C-藻藍素/藻藍蛋白抗體IgG9-芴 97%

C-Peptide( C-PEP )/FITC  熒光素標記C-肽抗體IgG3-正十六烷噻吩 97%

CPSA/FITC  熒光素標記鼠抗人復合前列腺特異性抗原單克隆抗體IgG3-己噻吩 98%
使用方法：

一、樣品采集：

1、食品樣品：樣品的采集與預培養(yǎng)按照樣品的采集與預培養(yǎng)按照菌檢驗要求進行。

2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。

3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。

4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。

一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。

2. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（最好用帶芯槍頭，下同）。

4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用

6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。