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規(guī)格 | 50T | 貨號 | YS-P014499 |
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品牌 | YSRIBIO |
服務流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
馬源性成分(Horse)檢測試劑盒(熒光-PCR法) | 50T | YS-P014499 |
PCR反應鑒定——PCR反應條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
抗內(nèi)皮細胞抗體(AECA)檢測試劑盒英文名稱:AECA ELISA Kit載脂蛋白樣蛋白6抗體包裝5g
抗利尿/血管加壓素/精氨酸加壓素(ADH/VP/AVP)檢測試劑盒英文名稱:ADH/VP/AVP ELISA Kit凋亡相關(guān)蛋白TGFb信號抗體包裝100g
抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)檢測試劑盒英文名稱:TRACP-5b ELISA KitA2LD1蛋白抗體包裝25g
抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP5b)檢測試劑盒英文名稱:TRACP5b ELISA Kitα1,4-N-乙酰葡糖轉(zhuǎn)移酶α4Gn-T抗體包裝5g
抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)檢測試劑盒英文名稱:TRACP ELISA Kit芳香乙酰脫乙?;缚贵w包裝10ml
抗抗體(AsAb)檢測試劑盒英文名稱:AsAb ELISA Kit芳香乙酰脫乙?;笜拥鞍?抗體包裝1g
抗狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)檢測試劑盒英文名稱:ATGA/TGAB ELISA Kit氨基乙二酸半脫氫酶磷酸泛酰巰基乙轉(zhuǎn)移酶抗體包裝25g
抗狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)檢測試劑盒英文名稱:TPO-Ab ELISA Kit賴氨酸酮戊二酸還原酶抗體包裝5g
抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)檢測試劑盒英文名稱:EMA IgA ELISA Kit錨蛋白重復域6抗體包裝25g
抗環(huán)胍氨酸肽抗體(Anti-CCP-antibody)檢測試劑盒英文名稱:Anti-CCP-antibody ELISA Kit精氨酸酶2抗體包裝5g
抗紅細胞抗體(RBC)檢測試劑盒英文名稱:RBC ELISA Kit固酮還原酶家族1成員C3抗體包裝1g
抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)檢測試劑盒英文名稱:gp210 ELISA Kit促腎上腺皮質(zhì)受體包裝5g
抗核抗體(ANA)檢測試劑盒英文名稱:ANA ELISA Kit褐黑素相關(guān)蛋白ART抗體包裝1g
抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)檢測試劑盒英文名稱:ssDNA ELISA Kit腎上腺皮質(zhì)線粒體鐵氧還蛋白抗體包裝250mg
抗單核細胞抗體(AMA)檢測試劑盒英文名稱:AMA ELISA KitAllgrove綜合征相關(guān)蛋白抗體包裝5g
馬源性成分(Horse)檢測試劑盒(熒光-PCR法)CR ELISA Kit 大鼠鈣結(jié)合蛋白六亞二異酸酯 99%
HABP ELISA Kit 大鼠透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白鹽酸土霉素 95%
BMP-6 ELISA Kit 大鼠骨形成蛋白62-硫 98%
大鼠淋巴因子ELISA Kit 大鼠淋巴因子醋酸維生素A USP/EP
mALB ELISA Kit 大鼠微量蛋白天平臺 980*750*800
AcSDKP ELISA Kit 大鼠N-酰-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-脯氨酸上門維修費用
PA-IgG/M/A ELISA Kit 大鼠抗血小板抗體IgG/M/APP風機 5#/2.2KW
NTX)ELISA Kit 大鼠Ⅰ型膠原N末端肽4-氯-5--1,3-二氧雜環(huán)戊烯-2-酮 98%
反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
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