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當(dāng)前位置:上海研生實(shí)業(yè)有限公司>>PCR類>>熒光定量PCR試劑盒>> 50次豬細(xì)小病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

豬細(xì)小病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

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產(chǎn)品型號50次

品       牌其他品牌

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所  在  地上海市

更新時(shí)間:2021-11-20 15:50:01瀏覽次數(shù):109次

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規(guī)格 50次 貨號 YS-P013539
品牌 YSRIBIO
豬細(xì)小病毒探針法熒光定量PCR試劑盒原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)

2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液:1×20ml。

4、 檢測稀釋液A:1×10ml。

5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
服務(wù)流程:

公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

豬細(xì)小病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

50次

YS-P013539

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟

溫度

時(shí)間

循環(huán)數(shù)

預(yù)變性

94℃

5   min

1

變性

94℃

10   sec

30-40

退火

50-65℃

20   sec

30-40

延伸

72℃

30   sec/kb

30-40

終延伸

72℃

5   min

1

 

QQ截圖20191211135002.jpg 

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;

②堿基配對原則;

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。

(3) 簡便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。

(4) 對標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

反應(yīng)五要素:

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:

①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。

豬肌聯(lián)蛋白抗體(TTN) 胰蛋白酶1:250磷酸化谷氨酸受體1抗體

豬不對稱二精氨酸(ADMA) 胰蛋白酶1:2500G蛋白偶聯(lián)受體48抗體

GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)阿利多G氨丁酸A型受體α2/GABAA Rα2抗體

豬可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體(sEPCR)核糖核酸酶A(美侖);RNase A;核糖核酸酶IG氨丁酸A型受體α4/GABAA Rα4抗體

豬結(jié)腸癌抗原(CCA) 5‘-磷酸吡哆,一水G氨丁酸A型受體α6/GABAA Rα6抗體

豬色素P450家族成員21B(CYP21B)  NADPH;還原輔酶Ⅱ四鈉鹽;(羅氏)磷酸化γ1氨丁酸受體GABAA Rβ1抗體

α-血紅蛋白穩(wěn)定蛋白(αHSP)  NADPH;還原輔酶Ⅱ四鈉鹽;(美侖)G氨丁酸受體β2/GABAA Rβ2抗體

豬載脂蛋白C4(ApoC4) 帕米膦酸G蛋白偶聯(lián)受體17抗體

B-淋巴趨化因子(BLC) α,α-二-4-哌啶G蛋白偶聯(lián)受體102抗體

豬粒特異性抗核抗體(GSANA)  葡萄糖氧化酶G蛋白偶聯(lián)受體136抗體

豬白介素1受體II(IL-1R2)溶菌酶(蛋清)G蛋白偶聯(lián)受體126抗體

豬腦紅蛋白(NGB)HRP;辣根過氧化物酶G蛋白偶聯(lián)受體105抗體

豬骨成型蛋白1(BMP-1) 透明質(zhì)酸酶G蛋白偶聯(lián)受體C5B抗體

豬肌球蛋白輕鏈激酶(MLCK/MYLK)抑肽酶(來源于牛肺,胰蛋白酶抑制劑)G蛋白偶聯(lián)受體33抗體

豬補(bǔ)體因子H(CFH)E-64,蛋白酶抑制劑谷氨酸受體紅藻氨酸離子1抗體

豬磷脂酶D2(PLD2)阿齊沙坦酯一般受體磷酸肌相關(guān)支架蛋白1抗體
豬細(xì)小病毒探針法熒光定量PCR試劑盒RSK3/Ribosomal S6 kinase 3  核糖體蛋白S6激酶家族RSK3抗體氯化溶液 3.3mol/L(3.3N)

Phospho-RSK3 (Thr353/356)   磷酸化核糖體蛋白S6激酶家族RSK3抗體氯化溶液 3mol/L(3N)

Phospho-RSK3 (Thr356/Ser360)   磷酸化核糖體蛋白S6激酶家族RSK3抗體5-酰噻吩-2-酸 98%

RSV  呼吸道合胞病單克隆抗體4-氨酸鹽酸鹽 97%

RXR Alpha/RXRA  核受體RXRα抗體鄰氨酸鹽酸鹽  95%

RXR gamma  維酸受體G抗體4-氨酸頻哪酯  98%

RUNX1/AML1  急性髓白血病1蛋白抗體2-氨酸頻哪酯,97%

phospho-RUNX1/AML1(Ser249)  磷酸化急性髓白血病1蛋白抗體6-溴吡啶-3-酸 97%


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