當(dāng)前位置:上海研生實(shí)業(yè)有限公司>>PCR類>>熒光定量PCR試劑盒>> 50次流感病毒H3N2亞型檢測試劑盒(熒光PCR法)
規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013714 |
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品牌 | YSRIBIO |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
流感病毒H3N2亞型檢測試劑盒(熒光PCR法) | 50T | YS-P013714 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
猴胰島素樣生長因子1受體(IGF1R)3-溴酮酸(分子生物學(xué))線粒體鈉/氫交換蛋白質(zhì)2抗體
猴纖維蛋白肽A(FPA) 鹽酸氟(標(biāo)準(zhǔn)品)神經(jīng)元素1抗體
猴染色盒同源物3(CBX3)鴉膽子苦(標(biāo)準(zhǔn)品)神經(jīng)肽Y抗體
猴狀腺素抗體(TAb)鹽酸哌唑(標(biāo)準(zhǔn)品)神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體
猴蛋白二硫化物異構(gòu)酶A3(PDIA3)7-羥谷氨酸受體2B抗體
猴凝血因子XIII A1多肽(F13A1) 鹽酸奈福泮(標(biāo)準(zhǔn)品)神經(jīng)纖毛蛋白2抗體
猴巨噬炎性蛋白5(MIP-5)睪酮; 素(標(biāo)準(zhǔn)品)谷氨酸受體2D抗體
猴肟前列腺素D2(PGD2-MOX)布美他尼;丁氧酸(標(biāo)準(zhǔn)品)原癌因N-Ras抗體
猴肌動蛋白束蛋白(FSCN)氨環(huán)酸(標(biāo)準(zhǔn)品)T激活核轉(zhuǎn)錄因子4抗體
猴X型膠原(COL10)氨環(huán)酸腦低密度脂蛋白受體蛋白1抗體
猴絲裂原激活蛋白激酶激酶1(MAP2K1)胡椒(標(biāo)準(zhǔn)品)軸突蛋白2抗體
猴嗜中性粒防御素α1(DEFα1)谷(標(biāo)準(zhǔn)品)腎小球粘附分子受體抗體
猴腫瘤蛋白P53(TP53)GW501516神經(jīng)生長調(diào)節(jié)蛋白1抗體
猴43KDa Tar DNA結(jié)合蛋白(TDP43)布洛芬(標(biāo)準(zhǔn)品)軸突生長誘向因子G2抗體
猴谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶α1(GSTα1)比沙可啶(標(biāo)準(zhǔn)品)黑色素瘤硫酸軟骨素蛋白多糖4抗體
猴III型前膠原(PCIII)醋酸氯己定(標(biāo)準(zhǔn)品)NDST1蛋白抗體
流感病毒H3N2亞型檢測試劑盒(熒光PCR法)CYP2E1/FITC 熒光素標(biāo)記抗色素P450ⅡE1抗體IgG氯化鑭,七水 99.9% metals basis
CYP3A4/FITC 熒光素標(biāo)記抗色素P450 3A4抗體IgG結(jié)晶氯化鋰 SP
CYP8A1/PTGIS/FITC 熒光素標(biāo)記前列環(huán)素合成酶抗體IgG鉛 flakes,SP
CYP19/FITC 熒光素標(biāo)記色素P450 19抗體IgG二氧化錳 SP
CYP21/FITC 熒光素標(biāo)記21-羥化酶抗體IgG二氧化錳 99.99% metals basis
Cyr61/FITC 熒光素標(biāo)記富半胱氨酸肝素結(jié)合蛋白61IgG硫酸鎂,七水 SP
Cytochrome C/FITC 熒光素標(biāo)記色素 C抗體IgG硫酸鎂,七水 99.99% metals basis
Cytochrome P450 2C19/CYP2C19 /FITC 熒光素標(biāo)記色素P450 2C19抗體IgG硫酸錳,一水 SP
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