服務(wù)流程：

公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

組成及試劑配制:

1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）

2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液：1×20ml。

4、 檢測稀釋液A：1×10ml。

5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；

②堿基配對原則；

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。

(3) 簡便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。

(4) 對標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

雞色素P450家族成員1B1(CYP1B1) Cy7標(biāo)記的兔抗雞IgM

雞血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(ACE2) PE標(biāo)記的兔抗雞IgM

雞核糖核酸酶H(RNASEH)PE-Cy3標(biāo)記的兔抗雞IgM

雞發(fā)動蛋白1(DNM1) PE-CY5標(biāo)記的兔抗雞IgM

雞胰多肽(PP) APC標(biāo)記的兔抗雞IgM

雞遲現(xiàn)抗原(VLA) 羅丹明標(biāo)記的兔抗狗IgG

雞過氧化物酶體增殖物激活受體δ( PPAR-δ)FITC標(biāo)記的兔抗狗IgG

雞多效生長因子(PTN)膠體金標(biāo)記的兔抗狗IgG

雞β內(nèi)啡肽受體(β-EPR)堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的兔抗狗IgG

雞視黃結(jié)合蛋白4(RBP4)辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗狗IgG

雞肝配蛋白A5 (EFNA5)生物素標(biāo)記的兔抗狗IgG

雞組織蛋白酶L(CTSL)  Cy3標(biāo)記的兔抗狗IgG

雞促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH) Cy5標(biāo)記的兔抗狗IgG

雞發(fā)動蛋白2(DNM2) Cy5.5標(biāo)記的兔抗狗IgG

雞BCL2相關(guān)死亡促進(jìn)因子因子(BAD) Cy7標(biāo)記的兔抗狗IgG

雞葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白3(GLUT3) PE-Cy3標(biāo)記的兔抗狗IgG
羅斯河病毒檢測試劑盒（熒光PCR法） Alpha-AF/ Alpha-Afa/FITC  熒光素標(biāo)記α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶抗體IgGD-異亮氨酸 98%

AFP/FITC  熒光標(biāo)記鼠抗人胎蛋白單克隆抗體IgGL-異亮酰鹽酸鹽 98%

AFP/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記鼠抗人胎蛋白單克隆抗體（包被）IgGL-異亮氨酸烯酯對磺酸鹽 98%

AFP/Biotin  生物素化鼠抗人胎蛋白單克隆抗體（包被）IgGL-異亮氨酸叔丁酯鹽酸鹽 97%

AFP/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記鼠抗人胎蛋白單克隆抗體(檢測)IgGD-別異亮氨酸 98%

AFP/Biotin  生物素化鼠抗人胎蛋白單克隆抗體(檢測)IgGFmoc-Ile-OPfp 98%

CEA/Gold  膠體金離子標(biāo)記鼠抗人癌胚抗原單克隆抗體（包被）IgGH-Ile-2-Chlorotrityl Resin 0.3~0.8 mmol/g, 100~200 mesh

CEA/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記鼠抗人癌胚抗原單克隆抗體（包被）IgGFmoc-Ile-Wang resin 100-200 mesh, Substitution 0.3-0.8mmol/g
反應(yīng)五要素：

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：

①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。