參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：肉毒桿菌毒素F檢測試劑盒（熒光PCR法）
產(chǎn)品貨號：YS-P013942

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品分類：PCR檢測試劑盒

產(chǎn)品運輸：低溫運輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品特點：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。

實驗過程：

一、試劑準備

1. DNA模板

2．公司產(chǎn)品僅用于科研對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步驟

1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer             5μl

dNTP mixl                 4μl

引物1（10pM）               2μl

引物2（10PM）              2μl

Taq酶（2U/μl）            1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

加ddH2O至               50 μl

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。

3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點優(yōu)勢：

1.   特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析，經(jīng)過TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。

2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。

3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。

4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。

5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除TIANDZ公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。

6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。

豚鼠早期生長應答蛋白3(EGR3)(1R,4R)-N-去鹽酸舍曲林肌漿網(wǎng)鈣ATP酶1/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣ATP酶1抗體

豚鼠卵清蛋白特異性IgG(OVA sIgG) 外消旋順式-N-去鹽酸舍曲林腫瘤相關(guān)胰蛋白酶抑制劑1抗體

豚鼠堿性成纖維生長因子(bFGF/FGF2)外消旋反式-N-去鹽酸舍曲林剪接體相關(guān)蛋白62抗體

豚鼠保護素(CD59)外消旋反式舍曲林磷酸化原癌因蛋白18抗體

豚鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)外消旋順式鹽酸舍曲林磷酸化原癌因蛋白18抗體

豚鼠激肽釋放酶6(KLK6) 氨酰舍曲林葡萄糖苷酸Schlafen家族14抗體

豚鼠角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)  4-(S)-1-去()-1-氧-2-(R,S)-羥舍曲林SEMCAP3蛋白抗體

豚鼠嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素B(CYPB)  (1S,4R)鹽酸舍曲林小泛素相關(guān)修飾蛋白1抗體

豚鼠胰島素原(PI)外消旋2-異戊酸(戊酸鈉雜質(zhì)C)Smad蛋白相互作用蛋白1抗體

豚鼠突觸素(SYP)3-羥戊酸乳酸細菌表面蛋白抗體

豚鼠激活素A(ACVA)外消旋5-羥戊酸鈉鹽磷酸化14-3-3 α/β/ζ抗體

豚鼠靶向核糖核酸酶(TR)戊酸-d6絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1抗體

豚鼠神經(jīng)降壓素(NT) 戊酸β-D-葡萄糖苷酸脂肪酸轉(zhuǎn)運蛋白5抗體

豚鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF) 氨他非分揀微管連接蛋白抗體

豚鼠凝血因子Ⅻ(F12)  鹽酸特拉唑絲氨酸蛋白酶抑制劑A10抗體

豚鼠蛋白二硫化物異構(gòu)酶A3(PDIA3)2-芐咪唑啉絲氨酸蛋白酶抑制劑B1抗體
肉毒桿菌毒素F檢測試劑盒（熒光PCR法）Phospho-Smad3 (Ser423/425) /FITC   熒光素標記磷酸化信號轉(zhuǎn)導分子SMAD3抗體IgGN-叔丁氧羰-N'-(酰)-L-賴氨酸   BR

Smad4/FITC  熒光素標記Smad4抗體IgGN-叔丁氧羰-N'-(2-氯芐氧羰)-L-賴氨酸 98%

Smad7/FITC  熒光素標記Smad 7抗體IgGNα-BOC-Nε-FMOC-L-賴氨酸 BR

SMC1/FITC  熒光素標記染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白質(zhì)１抗體IgGN-Boc-N'-Fmoc-D-賴氨酸 97%

Phospho-SMC1 (Ser360) /FITC  熒光素標記磷酸化染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白質(zhì)１抗體IgGBoc-Lys(Z)-pNA 98.5%

Phospho-SMC1 (Ser957)/FITC  熒光素標記磷酸化染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白質(zhì)１抗體IgG丁氧羰-硫氨酸(O)-OH   BR

SMN1/FITC  熒光素標記運動神經(jīng)元生存蛋白1抗體IgGN-叔丁氧羰-N'-芴氧羰-L-鳥氨酸   99%

Snail/FITC  熒光素標記抗Snail蛋白抗體IgGN-叔丁氧羰-N'-芐氧羰-L-鳥氨酸   98%
使用方法：

一、樣品采集：

1、食品樣品：樣品的采集與預培養(yǎng)按照樣品的采集與預培養(yǎng)按照菌檢驗要求進行。

2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。

3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。

4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。

一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。

2. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（最好用帶芯槍頭，下同）。

4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用

6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。