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規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013310 |
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品牌 | YSRIBIO |
服務流程:
公司產品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數據分析——結果交付——售后服務。
產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
羊源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒 | 50次 | YS-P013310 |
PCR反應鑒定——PCR反應條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數 |
預變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。
人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA) 龍膽二糖卷曲螺旋結構域蛋白43抗體
人胚外胚層發(fā)育蛋白(EED)鹽酸異腎上腺素(標準品)卷曲螺旋結構域蛋白46抗體
人皮膚T淋巴相關抗原(CTAGE) 鹽酸異腎上腺素(進口)卷曲螺旋結構域蛋白63抗體
人皮膚橋蛋白(DPT) 鹽酸異腎上腺素(國產)卷曲螺旋結構域蛋白54抗體
人皮膚反應因子/炎性因子(SRF/IF) 西洛多辛卷曲螺旋結構域蛋白61抗體
人皮膚T淋巴相關抗原(CLA/CTAGE) 西洛多辛(標準品)卷曲螺旋結構域蛋白8抗體
人脾臟酪氨酸激酶(SYK) 溴莫尼定神經酰激酶CERK抗體
人平滑肌肌球蛋白(SMM) 溴莫尼定(標準品)分裂周期樣激酶2抗體
人平足蛋白(PDPN)伊馬替尼分裂周期樣激酶3抗體
人破骨激因子1 (OSF)阿利克侖-517號染色體開放閱讀框49抗體
人破骨相關受體(OSCAR)藍銅肽/甘氨酰-L-組氨酰-L-賴氨酸17號染色體開放閱讀框53抗體
人免疫球蛋白M(IgM) 氨苯蝶啶 17號染色體開放閱讀框57抗體
人葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)氨苯蝶啶(標準品)17號染色體開放閱讀框64抗體
人葡萄糖6磷酸異構酶(GPI) 拉呋替丁17號染色體開放閱讀框66抗體
人葡萄糖激酶(GCK) 拉呋替?。藴势罚?7號染色體開放閱讀框74抗體
人葡萄糖激酶調節(jié)蛋白(GKRP) 托可索侖/維生素E聚乙二琥珀酸酯17號染色體開放閱讀框75抗體
羊源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒Phospho-CRMP-2 (Thr514) 磷酸化二氫嘧啶酶樣2抗體硝酸鉑溶液 Pt, 15%
CRLR/CGRPR1 降鈣素基因相關肽1型受體抗體二溴化鈀 Pd 40 %
SLAMF7/CD319 SLAMF7抗體氯鈀酸 Pd 26.2%
CRP C-反應蛋白抗體氯化鈀 Pd 59-60%
CRP C-反應蛋白單克隆抗體氯鉑酸 98%
CREB-1 環(huán)腺苷酸應答元件結合蛋白抗體氫氧化鈀 AR,99.99%
CREB-1 環(huán)腺苷酸應答元件結合蛋白抗體硫酸鈀 Pd 51.2%-53.9%
phospho-CREB-1(Ser133) 磷酸化CREB-1抗體硫酸鈀,二水 水 Pd ≥44%
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
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