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克柔念珠菌染料法熒光定量PCR試劑盒

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產(chǎn)品型號50次

品       牌其他品牌

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所  在  地上海市

更新時間:2021-11-20 16:27:04瀏覽次數(shù):115次

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規(guī)格 50次 貨號 YS-P013609
品牌 YSRIBIO
克柔念珠菌染料法熒光定量PCR試劑盒原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。

服務(wù)流程:

公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

克柔念珠菌染料法熒光定量PCR試劑盒

50次

YS-P013609

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟

溫度

時間

循環(huán)數(shù)

預(yù)變性

94℃

5   min

1

變性

94℃

10   sec

30-40

退火

50-65℃

20   sec

30-40

延伸

72℃

30   sec/kb

30-40

終延伸

72℃

5   min

1

組成及試劑配制:

1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)

2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液:1×20ml。

4、 檢測稀釋液A:1×10ml。

5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
QQ截圖20191211135002.jpg

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;

②堿基配對原則;

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。

(3) 簡便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。

(4) 對標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

豬抗酸性磷酸酶(ACP5)肌苷酸二鈉人類狀瘤病18 E7抗體

豬狀腺原氨酸(Thyronine)環(huán)索奈德人類狀瘤病31 E7抗體

豬脂聯(lián)素(ADP/Acrp30)環(huán)索奈德(標(biāo)準(zhǔn)品)轉(zhuǎn)錄因子HES2抗體

豬集聚蛋白(AGRN) 羅漢松脂素,羅漢松脂酚轉(zhuǎn)錄因子HES3抗體

Apelin 36(AP36) 酪氨酰氨多磷酸肌激酶IPMK抗體

豬白介素1受體拮抗劑(IL-1ra)皂素;茶皂素IKK復(fù)合物相關(guān)蛋白抗體

豬鳥苷酸結(jié)合蛋白4(GBP4) 炔諾酮(標(biāo)準(zhǔn)品)IQSEC2抗體

豬質(zhì)金屬蛋白酶-10(MMP-10)炔諾酮交叉蛋白2抗體

豬組織蛋白酶B(CTSB)松(標(biāo)準(zhǔn)品)三磷酸肌苷焦磷酸酶抗體

豬神經(jīng)營養(yǎng)因子受體3型(NTRK3)可松(美國進(jìn)口)吲哚2,3-雙加氧酶抗體

豬鳥苷酸環(huán)化酶激活因子2B(GUCA2B) 柳酚,利膽酚(標(biāo)準(zhǔn)品)白介素19抗體

豬糖化依賴的黏附分子(GlyCAM1)  柳酚,利膽酚抑制素A/Inhibin α抗體

豬二級淋巴組織趨化因子(SLC/CCL21)磺酸瑞波西汀胰島素因增強(qiáng)結(jié)合蛋白1/2抗體

豬絲氨酸蛋白酶33(PRSS33)酮色林,凱他色林磷酸化白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體

豬蛋白激酶抑制劑α(PKIα )酮色林,凱他色林(標(biāo)準(zhǔn)品)磷酸化白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體

豬孕酮和adipoQ受體家族成員Ⅶ(PAQR7)章鹽酸鹽;正辛弗林磷酸化白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體
克柔念珠菌染料法熒光定量PCR試劑盒5-HT/RBITC  紅色羅丹明標(biāo)記5-羥色抗體IgG1-丁-3-咪唑辛硫酸鹽 99%

5-HTR1A/FITC  熒光素標(biāo)記5-羥色受體1A抗體IgG1-丁-3-咪唑硫酸鹽 95%

5-HTR1B /FITC  熒光素標(biāo)記5-羥色受體1B抗體IgG5-溴異喹啉 98%

5-HTR2A/FITC  熒光素標(biāo)記5-羥色受體2A抗體IgG5-溴-7-氮雜吲哚 98%

5-HTR2B/FITC  熒光素標(biāo)記5-羥色受體2B(5-HT/serotonin R2B)抗體IgGN-(叔丁氧羰)-1,4-丁二 97%

5-HTR3/FITC  熒光素標(biāo)記5-羥色受體3抗體IgGN-丁溴化吡啶 99%

5-HTR4/FITC  熒光素標(biāo)記5-羥色受體4抗體IgG1-丁-3-咪唑溴鹽 97%

5-LOX/FITC  熒光素標(biāo)記5-脂氧合酶抗體IgG1-丁-3-咪唑四氟酸鹽 97%
反應(yīng)五要素:

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:

①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。


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