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上海研生實(shí)業(yè)有限公司
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漢灘病毒檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)

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產(chǎn)品型號(hào)50T

品       牌其他品牌

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所  在  地上海市

更新時(shí)間:2021-11-20 20:33:57瀏覽次數(shù):103次

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規(guī)格 50T 貨號(hào) YS-P013214
品牌 YS-P013960
漢灘病毒檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)

2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液:1×20ml。

4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。

5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
服務(wù)流程:

公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號(hào)

漢灘病毒檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)

50T

YS-P013960

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟

溫度

時(shí)間

循環(huán)數(shù)

預(yù)變性

94℃

5   min

1

變性

94℃

10   sec

30-40

退火

50-65℃

20   sec

30-40

延伸

72℃

30   sec/kb

30-40

終延伸

72℃

5   min

1

 

QQ截圖20191211135002.jpg 

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;

②堿基配對(duì)原則;

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。

(3) 簡(jiǎn)便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。

(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

反應(yīng)五要素:

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:

①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

IgA Fc片段受體(FcaR)去鹽酸環(huán)扎林PE-Cy3標(biāo)記的兔抗親和素

XIV型膠原 (COL14)δ9(11)-睪酮PE-Cy7標(biāo)記的小鼠抗牛IgG

雞補(bǔ)體1q(C1q) D-去腎上腺素氫鹽辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的兔抗牛IgM

雞補(bǔ)體因子1R(Clr)N-芐氧羰-6-氨己酸辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的兔抗牛IgG

雞抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA) N-(+)-生物素-6-氨己酸辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗牛IgG

雞骨成型蛋白4 (BMP-4) 維生素E辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的兔抗生物素抗體IgG

雞谷氨酸脫氫酶(GDH/GLDH)  D-α-酚琥珀酸鹽FITC標(biāo)記的兔抗牛IgM

雞二氧化酶(DAO) (+)-α-酚醋酸鹽FITC標(biāo)記的兔抗牛IgG

雞質(zhì)金屬蛋白酶25(MMP-25)ent-那格列奈羅丹明標(biāo)記的兔抗牛IgM

雞生長(zhǎng)分化因子5(GDF5)ent-那格列奈酰-β-D-葡萄糖苷酸PE標(biāo)記的羊抗牛IgG

雞垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽受體 (PACAPR)那格列奈酰-β-D-葡萄糖苷酸PE標(biāo)記的兔抗牛IgM

雞鳥苷酸交換因子(GEF)  脫[1-(4,4-二氟代環(huán)己烷酰)-1-]-3-羥馬拉維若Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗牛IgG

雞孕酮和adipoQ受體家族成員Ⅶ(PAQR7)4-羥馬拉維若PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗牛IgG

雞核孔蛋白214kda(NUP214)依澤替米貝酮PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗牛IgM

XC趨化因子受體1(XCR1)3-O-酰依澤替米貝PE-Cy7標(biāo)記的兔抗牛IgM

雞拮抗凋亡轉(zhuǎn)錄因子(AATF)依澤替米貝羥β-D-葡萄糖苷酸 Cy3標(biāo)記的羊抗牛IgG
漢灘病毒檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)TGF- BetaR 3/FITC  熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子–β受體3抗體IgGN,N'-琥珀酰亞碳酸酯 98%

TGM3/FITC  熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)谷氨酰酶3抗體IgGD-谷氨酰 98%

Thioredoxin 1/FITC  熒光素標(biāo)記硫氧還蛋白抗體IgG4,4'-二氧三氯 98%

Thymosin Alpha-1/FITC  熒光素標(biāo)記胸腺肽 α-1抗體IgG4,5-二咪唑 98%

Tie1/FITC  熒光素標(biāo)記血管生成素-1受體抗體IgG4-[(2,4-二氧)(Fmoc-氨)]氧酸 98%

Tie2/FITC  熒光素標(biāo)記上皮生長(zhǎng)因子樣域酪氨酸激酶2IgGN-芴氧羰-L-2,3-氨酸  97%

Phospho-Tie2 (Tyr992) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化血管生成素受體2抗體IgGN,N'-二叔丁氧羰-L-組氨酸 BR

Phospho-Tie2 (Ser1119) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化血管生成素受體2抗體IgGL-2,4-二氨丁酸氫鹽 98%


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