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當前位置:上海研生實業(yè)有限公司>>PCR類>>熒光定量PCR試劑盒>> 50次巴爾通體通用染料法熒光定量PCR試劑盒

巴爾通體通用染料法熒光定量PCR試劑盒

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產(chǎn)品型號50次

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2021-11-20 15:39:43瀏覽次數(shù):133次

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規(guī)格 50次 貨號 YS-P013485
品牌 YSRIBIO
巴爾通體通用染料法熒光定量PCR試劑盒原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。

服務流程:

公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務。

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

巴爾通體通用染料法熒光定量PCR試劑盒

50次

YS-P013485

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

循環(huán)步驟

溫度

時間

循環(huán)數(shù)

預變性

94℃

5   min

1

變性

94℃

10   sec

30-40

退火

50-65℃

20   sec

30-40

延伸

72℃

30   sec/kb

30-40

終延伸

72℃

5   min

1

組成及試劑配制:

1、酶標板:一塊(96孔)

2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液:1×20ml。

4、 檢測稀釋液A:1×10ml。

5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
QQ截圖20191211135002.jpg

PCR反應的特異性決定因素為:

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;

②堿基配對原則;

③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。

(3) 簡便、快速

PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。

(4) 對標本的純度要求低

不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。

大鼠紅衍生核因子2樣蛋白2(NFE2L2)N-亞硝二正(標準品)磷酸化雌激素受體α抗體

大鼠尿激酶型纖溶酶原激活因子(PLAU/uPA)(標準品)磷酸化真核翻譯起始因子4B抗體

大鼠尿激酶型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)2-戊酮(分析標準品,用于環(huán)境分析,≥99.8%(GC))真核翻譯起始因子4B抗體

大鼠血管內(nèi)皮生長因子B(VEGF-B)3-戊酮(分析標準品,用于環(huán)境分析,≥99.5%(GC))磷酸化轉(zhuǎn)錄接頭蛋白EP300抗體

大鼠血管內(nèi)皮生長因子C(VEGF-C)二十五烷(分析標準品,>99%(GC))磷酸化上皮癌轉(zhuǎn)化蛋白2抗體

大鼠血管內(nèi)皮生長因子D(VEGF-D)正辛烷(分析標準品,≥99.7%(GC))磷酸化真核翻譯起始因子4G抗體

大鼠血管內(nèi)皮生長因子受體2(VEGFR-2/KDR)二氯(分析標準品,用于環(huán)境分析,≥99.99%(GC))表皮生長因子受體5抗體

大鼠血管內(nèi)皮粘附分子1(VCAM-1/CD106)1,4-二氧六環(huán)(分析標準品,≥99.9%(GC))電子轉(zhuǎn)移黃素蛋白β肽/黃素蛋白抗體

大鼠血管活性腸肽(VIP)3-1,2-標準溶液(1000μg/g,體:酸酯)鈉通道蛋白α ENaC

大鼠遲現(xiàn)抗原(VLA)環(huán)己烯(分析標準品,≥99.7% (GC))轉(zhuǎn)錄因子E2F8抗體

大鼠V-Fos FBJ骨髓瘤病癌因同源物(FOS)9,10-二蒽(標準品)內(nèi)皮單核激活肽2抗體

大鼠V-Ha-Ras Harvey肉瘤病癌因同源物(HRAS)3,5-二酚(標準品)外質(zhì)蛋白2抗體

大鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲氨酸蛋白酶抑制劑(vaspin)二環(huán)己(分析標準品,>99.5%(GC))上皮膜蛋白3抗體

大鼠內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(VF)二并噻吩(標準品)膜蛋白EVC2抗體

大鼠維生素D結(jié)合蛋白(DBP)9,10-二蒽(標準品)哺乳動物室管膜相關(guān)蛋白1抗體

大鼠血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13/VWFCP)反式-1,2-二氯烯(標準品)內(nèi)皮粘附分子抗體
巴爾通體通用染料法熒光定量PCR試劑盒Phospho-NMDAR2B (Tyr1070)  磷酸化谷氨酸受體2B抗體二溴化鈀 Pd 40 %

Phospho-NMDAR2B (Tyr1472)  磷酸化谷氨酸受體2B抗體氯鈀酸 Pd 26.2%

NR2C/NMDAR2C  谷氨酸受體2C抗體氯化鈀  Pd 59-60%

NR2D/NMDAR2D  谷氨酸受體2D抗體氯鉑酸 98%

N-Ras  原癌因抗體硝酸鈀 Pd 18.09 wt. % in nitric acid

NR1D1/REV-ERB alpha  核受體Rev-Erbα抗體硝酸鈀(II) 水合物 Pd ≥39.0%

Phospho-REV-ERB alpha (Ser55/59)  磷酸化核受體Rev-Erbα抗體氫氧化鈀 AR,99.99%

Nrf2  核因子2相關(guān)因子2抗體氫氧化鈀 20% Pd
反應五要素:

參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應遵循以下原則:

①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。


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