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雞種特異性基因檢測試劑盒(熒光PCR法)

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產(chǎn)品型號50T

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2021-11-21 09:50:08瀏覽次數(shù):149次

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規(guī)格 50T 貨號 YS-P014107
品牌 YSRIBIO
雞種特異性基因檢測試劑盒(熒光PCR法)原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)

2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液:1×20ml。

4、 檢測稀釋液A:1×10ml。

5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
服務(wù)流程:

公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

雞種特異性基因檢測試劑盒(熒光PCR法)

50T

YS-P014107

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟

溫度

時間

循環(huán)數(shù)

預(yù)變性

94℃

5   min

1

變性

94℃

10   sec

30-40

退火

50-65℃

20   sec

30-40

延伸

72℃

30   sec/kb

30-40

終延伸

72℃

5   min

1

 

QQ截圖20191211135002.jpg 

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;

②堿基配對原則;

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。

(3) 簡便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。

(4) 對標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

反應(yīng)五要素:

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:

①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。

綿羊性別決定區(qū)Y框蛋白18(SOX18) 3-磷酸甘油脫氫酶

綿羊低分子肝素(LMWH) 谷氨酸脫羧酶-65(抗原)

綿羊熱休克蛋白60(HSP-60/HSPD1) 糖原合酶激酶-3β(多肽)

綿羊肝配蛋白A4 (EFNA4)核突觸蛋白-γ抗原

綿羊核因子κB抑制蛋白β(IκBβ)胰高血糖素樣肽-1受體多肽

綿羊肌腱蛋白X(TNX)慶大霉素偶聯(lián)牛血清白蛋白

綿羊前膠原C端肽酶(PCP) 重組谷胱甘肽-轉(zhuǎn)移酶

綿羊抗存活素抗體(Anti-Surv) 慶大霉素偶聯(lián)雞卵白蛋白

綿羊蛋白C(PROC)人血清白蛋白

綿羊蛋白激酶C-δ1(PKCδ1)人beta 亞人絨毛膜促性腺激素抗原

綿羊端粒酶(TE)高遷移率族蛋白-1(抗原)

綿羊β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)水蛭素

綿羊Bcl2樣蛋白11(Bcl2L11)人類狀瘤病16抗原

綿羊脫氫表雄酮S7(DHEA-S7) 鐵調(diào)節(jié)蛋白25

綿羊10kDa干擾素γ誘導(dǎo)蛋白(IP-10/CXCL10)4羥壬烯酸偶聯(lián)牛血清白蛋白

綿羊癌抗雌激素藥物耐藥性因1(BCAR1) 干擾素-γ多肽抗原(人)
雞種特異性基因檢測試劑盒(熒光PCR法)CLCA4(Calcium-activated chloride channel 4)  鈣激活氯離子通道4抗原檸檬酸,一水 Standard for GC

C-Mer/MERTK (proto-oncogene tyrosine kinase)  c-mer原癌因酪氨酸激酶抗原檸檬酸,一水  AR,99.5%

c-Myc tag   c-Myc tag標(biāo)簽多肽檸檬酸,一水 99.995% metals basis

AU5 tag  AU5 tag標(biāo)簽抗原檸檬酸,一水 GR,99.8%

AU1 tag peptide  AU1 tag標(biāo)簽多肽檸檬酸,一水 ACS, 99.0-102.0%

Glu-Glu Tag peptide  Glu-Glu Tag多肽蛋白檸檬酸,一水 Ph. Eur., BP, USP, E330, 99.5-100.5%

CNGA2(Cyclic Nucleotide Gated Cation Alpha 2)  環(huán)核苷酸陽離子通道蛋白α2抗原檸檬酸 一水  ≥99.9998% metals basis

CNP/CNPase ( 2',3'-cyclic-nucleotide 3'-phosphodiesterase)  C型鈉尿肽抗原檸檬酸 AR,99.5%


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