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規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013682 |
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品牌 | YSRIBIO |
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
禽腦脊髓炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 50次 | YS-P013682 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
猴Pirin蛋白(PIR)硫酸氨葡萄糖(標(biāo)準(zhǔn)品)組蛋白酰轉(zhuǎn)移酶MOF抗體
猴膽綠素還原酶B(BLVRB)硫酸黃連堿(標(biāo)準(zhǔn)品)間質(zhì)蛋白抗體
猴ADAM金屬肽酶含血小板反應(yīng)蛋白1元4(ADAMTS4) 硫酸軟骨素(標(biāo)準(zhǔn)品)肌球蛋白輕鏈3抗體
猴促微管蛋白聚合蛋白(TPPP)龍膽苦苷(標(biāo)準(zhǔn)品)多藥耐藥蛋白/P-糖蛋白抗體
猴髓系觸發(fā)受體-1(TREM-1)龍腦(標(biāo)準(zhǔn)品)同源結(jié)構(gòu)蛋白1抗體
猴嗜鉻蛋白B(CgB) 蘆薈苷A增殖誘導(dǎo)蛋白5/肺癌相關(guān)蛋白10抗體
猴天青殺素1(AZU1) 蘆薈苷(標(biāo)準(zhǔn)品)肌鈀蛋白抗體
猴血管緊張肽酶A(ATA) 蘆薈寧(標(biāo)準(zhǔn)品)肌管素相關(guān)蛋白2抗體
猴雙調(diào)蛋白(AR) 蘆竹堿質(zhì)金屬蛋白酶18/19抗體
猴血紅蛋白H(HbH) 魯斯考皂苷元(標(biāo)準(zhǔn)品)增殖相關(guān)蛋白MAGOH抗體
猴纖蛋白原(FG) 綠原酸(標(biāo)準(zhǔn)品)絲裂原活化蛋白激酶激酶激酶4抗體
猴糖蛋白V(GP5) 綠原酸神經(jīng)分化因子6抗體
猴肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SPA)1,2-二-5-羥-3-吲哚酸酯;美卡比酯;同源盒蛋白Meis2抗體
猴周期素依賴性激酶4(CDK4) 氯化兩面針堿(標(biāo)準(zhǔn)品)Meteorin神經(jīng)膠質(zhì)分化調(diào)節(jié)蛋白抗體
猴線粒體肌酸激酶1B(CKMT1B) 氯化矢車菊素,花青素(標(biāo)準(zhǔn)品)棕櫚?;さ鞍?抗體
猴蛋白二硫化物異構(gòu)酶A5(PDIA5)羅漢果皂苷V(標(biāo)準(zhǔn)品)腦蛋白239抗體
禽腦脊髓炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒CD169/Siglec-1/sialoadhesin /FITC 熒光素標(biāo)記CD169抗體IgG4-氟-3-酸 98%
CD170/Siglec-5/FITC 熒光素標(biāo)記唾液酸結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集素5抗體IgG4-氟-3-氧酸 98%
Sialic14/FITC 熒光素標(biāo)記唾液酸結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集素14抗體IgG4-氟-2-三氟酸 98%
CD177/FITC 熒光素標(biāo)記CD177抗體IgG4-氟-3-(三氟)酸 98%
CD184/CXC-R4/FITC 熒光素標(biāo)記表面趨化因子受體4抗體IgG5-氟-2-羥酸 97%
CD226/DNAM-1/FITC 熒光素標(biāo)記CD226抗體IgG2-氟吡啶-4-酸 95%
CD229/SLAMF3/FITC 熒光素標(biāo)記CD229抗體IgG5-氟吡啶-3-酸 98%
CD244/NKR2B4/SLAMF4/FITC 熒光素標(biāo)記CD244抗體IgG2-氟吡啶 99%
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