當前位置:上海研生實業(yè)有限公司>>PCR類>>熒光定量PCR試劑盒>> 50次沙門氏菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒
規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013494 |
---|---|---|---|
品牌 | YSRIBIO |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
沙門氏菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒 | 50次 | YS-P013494 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學(xué)中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
大鼠Apelin蛋白(APLN)嘧霉(分析標準品,98.5%)外質(zhì)蛋白FRAS1抗體
大鼠組織蛋白酶B(CTSB)甜菜寧(分析標準品,99%)富馬酸水合酶抗體
大鼠免疫球蛋白G2a(IgG2a)霜靈標準溶液(10μg/ml,u=6%)成纖維生長因子21抗體
大鼠免疫球蛋白G2b(IgG2b)氯草定(標準品)核仁纖維蛋白抗體
大鼠免疫球蛋白G2c(IgG2c)溴磷(標準品)鐵蛋白輕鏈抗體
大鼠質(zhì)金屬蛋白酶11(MMP-11)吡(分析標準品,98.5%)肝核因子3抗體
大鼠表皮調(diào)節(jié)素(EREG)(0.105mg/ml)果糖1,6-二磷酸酯酶抗體
大鼠α1抗胰蛋白酶(α1-AT)(10μg/ml,u=6~5%,酮)6磷酸果糖激酶抗體
大鼠質(zhì)金屬蛋白酶14(MMP-14)敵稗標準溶液(0.100mg/ml)肌肉果糖二磷酸酶抗體
大鼠免疫球蛋白E Fc段受體Ⅱ(FcεRⅡ/CD23) 伏殺硫磷(標準品)纖維蛋白原γ鏈抗體
大鼠白介素34(IL-34)伏殺硫磷標準溶液(10μg/ml,u=7~3%,酮)纖維蛋白肽B抗體(血纖肽B)
大鼠磷酸烯式酮酸羧激酶1(PCK1)克螨特標準溶液(1.00mg/ml)原癌因c FGR抗體
大鼠平滑肌肌動蛋白α2(ACTα2)三氯殺蟲酯標準溶液(10μg/ml,u=2%)肢體畸形相關(guān)蛋白FHOD1抗體
大鼠白介素18結(jié)合蛋白(IL18BP)三氯殺蟲酯標準溶液(100μg/ml,u=2%)磷酸化肢體畸形相關(guān)蛋白FHOD1抗體
大鼠硬骨素(SOST)霜霉威(分析標準品,99%)纖連蛋白2抗體
大鼠叉頭框蛋白P3(FOXP3)多氯聯(lián)(Aroclor 1248)標樣(100μg/mL,體:)纖連蛋白7抗體
沙門氏菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒SEK1/MKK4 絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體N-順二酰亞 99%
Phospho-SEK1/MKK4 (Ser80) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體N-順二酰亞 超純級,99.5%
Phospho-SEK1/MKK4 (Ser257) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體二雙(2-氨)四酸 AR
Phospho-SEK1/MKK4 (Thr261) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體二四酸三鹽 98%
Phospho-SEK1/MKK4 (Ser257/Thr261) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體二四酸三鹽 99%
MEK6 絲裂原活化蛋白激酶MKK6抗體N--N-(3-磺)-3-鈉鹽 98%
Phospho-MEK6 (Ser207) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶MKK6抗體二四酸二鈉,二水 AR,98%
Phospho-MEK6 (Ser202) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶MKK6抗體二四酸二鈉,二水 色譜級,≥99.0%
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實性、準確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負責(zé),儀表網(wǎng)對此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。
溫馨提示:為規(guī)避購買風(fēng)險,建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。