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規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013807 |
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品牌 | YSRIBIO |
服務流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結果交付——售后服務。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
綠膿桿菌檢測試劑盒(熒光PCR法) | 50T | YS-P013807 |
PCR反應鑒定——PCR反應條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。
兔白介素8(IL-8)2-噻吩(>97.0%(GC))mRNA結合蛋白抗體
兔可溶性半乳糖凝集素3結合蛋白(LGALS3BP)5-酰-2-噻吩酸(含有數(shù)量不等的酸酐)環(huán)指蛋白126抗體
兔白分化抗原CD97(CD97) 2-噻吩(>98.0%(GC))小鼠抗人紅單克隆抗體
兔熱休克蛋白27(HSP-27/HSPB1) 2-噻吩(>97.0%(GC))視黃酸受體應答蛋白2抗體
兔酮酸脫氫酶β(PDHβ)3-噻吩-2-(>85.0%(GC))抗Rap1A抗體
兔15脂加氧酶(15-LO) 5-噻吩-2-(>97.0%(GC))RAS癌因相關蛋白RAB7抗體
兔肌球蛋白輕鏈1(MYL1)5--2-噻吩酸(>98.0%(GC))c-Myc應答蛋白抗體
兔間隙連接蛋白26(CX26) 3--2-噻吩酸(>98.0%(T))RAS癌因相關蛋白RAB6B抗體
兔水通道蛋白3(AQP-3) 5--2-噻吩酸(含有數(shù)量不等的酸酐)Rab蛋白GTP酶激活蛋白1抗體
兔血管性血友病因子(VWF)2-噻吩(>95.0%(GC))結腸癌相關因蛋白抗體(resistin-like β)
兔胎盤核糖核酸抑制劑(PRI) 2-戊噻吩(>98.0%(GC))磷酸化原癌因c-Met相關酪氨酸激酶抗體
兔白分化抗原CD109(CD109) 2-噻吩酸(>98.0%(T))環(huán)指蛋白6抗體
兔粘蛋白5B(MUC5B)四溴噻吩(>99.0%(GC))核糖核酸酶6抗體
兔補體C3轉(zhuǎn)化酶(C3c) 2-噻吩酸(含有數(shù)量不等的酸酐)磷酸化Ras特異性鳥嘌呤核苷酸釋放因子1
兔原鈣黏素1(PCDH1) 3-噻吩酸(含有數(shù)量不等的酸酐)磷酸化周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體
兔GATA結合蛋白2(GATA2)1,3,5-三(2-噻吩)(>98.0%(GC))磷酸化周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體
綠膿桿菌檢測試劑盒(熒光PCR法)IL-18R Beta/IL1R7/CD218b/FITC 熒光素標記白介素-18受體β鏈抗體IgG茚三酮,水合 AR,95.0%
IL-19/NG.1/FITC 熒光素標記白介素-19抗體IgG中性紅 for cell culture,≥90%(HPLC)
IL-20R Alpha/IL20RA/FITC 熒光素標記白介素20受體α鏈抗體IgG中性紅 indicator (pH 6.8-8.0)
IL-20RB/IL-20R2/FITC 熒光素標記白介素20受體β鏈抗體IgG中性紅 ACS
IL-20/FITC 熒光素標記白介素-20抗體IgG中性紅 生物染色級,for the Biological Stain
IL-21/FITC 熒光素標記白介素21抗體IgG萘 Standard for GC,≥99.5% (GC)
IL-21R/FITC 熒光素標記白介素21受體抗體IgG聚己內(nèi)酰粉 20-40目
IL-22/ZCYTO18/FITC 熒光素標記白介素-22抗體IgG聚己內(nèi)酰粉 30-60目
反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
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