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細菌通用染料法qPCR試劑盒

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產(chǎn)品型號50次

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2021-11-20 16:46:49瀏覽次數(shù):132次

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規(guī)格 50次 貨號 YS-P013639
品牌 YSRIBIO
細菌通用染料法qPCR試劑盒原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。

服務流程:

公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結果交付——售后服務。

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

細菌通用染料法qPCR試劑盒

50次

YS-P013639

PCR反應鑒定——PCR反應條件:

循環(huán)步驟

溫度

時間

循環(huán)數(shù)

預變性

94℃

5   min

1

變性

94℃

10   sec

30-40

退火

50-65℃

20   sec

30-40

延伸

72℃

30   sec/kb

30-40

終延伸

72℃

5   min

1

組成及試劑配制:

1、酶標板:一塊(96孔)

2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液:1×20ml。

4、 檢測稀釋液A:1×10ml。

5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
QQ截圖20191211135002.jpg

PCR反應的特異性決定因素為:

①引物與模板DNA特異正確的結合;

②堿基配對原則;

③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。

(3) 簡便、快速

PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。

(4) 對標本的純度要求低

不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。

N-酰β-D-氨葡萄糖苷酶(NAGase)蟾它靈(標準品)活化蛋白激酶D抗體

猴尿微量白蛋白(MAU)黃尿酸Jun激活區(qū)域-連接蛋白1抗體

猴干擾素誘導Tα亞族趨化因子 (I-TAC)舒巴坦酸磷酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-2抗體

猴補體調(diào)節(jié)蛋白(CCP)  舒巴坦酸(標準品)蛋白酪氨酸激酶JAK-3抗體

猴粘蛋白3(MUC3)沙蟾精(標準品)磷酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-3抗體

猴組織多肽抗原(TPA)坦西莫司,西羅莫司脂化物磷酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-3抗體

猴狀腺球蛋白(TG)聯(lián)雙酯(標準品)磷酸化原癌因c-Jun抗體

α-黑色素激素(αMSH) 聯(lián)雙酯蛋白質(zhì)酪氨酸激酶JAK2抗體

猴腺苷三磷酸結合盒轉運體A1(ABCA1)  富馬酸盧帕他定JWA蛋白抗體

猴間隙連接蛋白43(CX43) 富馬酸盧帕他定(標準品)連接蛋白JPH3抗體

猴中腦星型膠質(zhì)來源神經(jīng)營養(yǎng)因子(MANF) 正辛溴化銨,八烷溴化銨連接粘附分子C抗體

猴淋巴素β(LTβ) 酮麝香(標準品)蛋白質(zhì)酪氨酸激酶JAK-1抗體

猴纖維蛋白原降解產(chǎn)物(FDP) 酰十字孢堿(PKC-412)組蛋白去化酶JMJ2A抗體

猴水通道蛋白4(AQP-4) 無水鄰菲啰啉;1,10-菲羅啉組蛋白去化酶JMJD5抗體

猴表皮生長因子受體2(EGFR2)鄰菲啰啉一水;1,10-菲羅啉一水磷酸化γ連環(huán)蛋白抗體

猴可溶性半乳糖凝集素3結合蛋白(LGALS3BP)鄰菲啰啉鹽酸鹽一水;1,10-菲羅啉鹽酸鹽JNK相互作用蛋白4抗體
細菌通用染料法qPCR試劑盒ATRN/FITC  熒光素標記吸引素抗體IgG異-β-D-硫代半乳糖苷 98%

ATX/Autotaxin/E-NPP2/FITC  熒光素標記自分泌運動因子抗體IgG健那綠B BS, Dye content 65 %

ATXN1/Ataxin 1/FITC  熒光素標記兔抗人、大、小鼠失調(diào)癥蛋白1抗體IgG哲納爾氏染色素 Biological Stain grade

Ataxin-1(phospho Ser776)/FITC  熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化失調(diào)癥蛋白1抗體IgG雷氏曼著色劑 Histology stain grade

AU5 tag/FITC  熒光素標記AU5 tag標簽抗體IgG氯化硝四氮唑藍 98%

AU1 tag/FITC  熒光素標記抗AU1 tag標簽抗體IgG氯化硝四氮唑藍 分子生物學級

Aurora A /FITC  熒光素標記兔抗人、大、小鼠、牛、兔、馬、豬有絲分裂激酶A抗體IgG2--β-D-吡喃半乳糖苷 99%,non-animal origin

Phospho-Aurora A (p-Thr288) /FITC  熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化有絲分裂激酶A抗體IgG耐爾蘭 Dye content ≥75 %
反應五要素:

參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:

①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。


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