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規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013639 |
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品牌 | YSRIBIO |
服務流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結果交付——售后服務。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
細菌通用染料法qPCR試劑盒 | 50次 | YS-P013639 |
PCR反應鑒定——PCR反應條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。
猴N-酰β-D-氨葡萄糖苷酶(NAGase)蟾它靈(標準品)活化蛋白激酶D抗體
猴尿微量白蛋白(MAU)黃尿酸Jun激活區(qū)域-連接蛋白1抗體
猴干擾素誘導Tα亞族趨化因子 (I-TAC)舒巴坦酸磷酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-2抗體
猴補體調(diào)節(jié)蛋白(CCP) 舒巴坦酸(標準品)蛋白酪氨酸激酶JAK-3抗體
猴粘蛋白3(MUC3)沙蟾精(標準品)磷酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-3抗體
猴組織多肽抗原(TPA)坦西莫司,西羅莫司脂化物磷酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-3抗體
猴狀腺球蛋白(TG)聯(lián)雙酯(標準品)磷酸化原癌因c-Jun抗體
猴α-黑色素激素(αMSH) 聯(lián)雙酯蛋白質(zhì)酪氨酸激酶JAK2抗體
猴腺苷三磷酸結合盒轉運體A1(ABCA1) 富馬酸盧帕他定JWA蛋白抗體
猴間隙連接蛋白43(CX43) 富馬酸盧帕他定(標準品)連接蛋白JPH3抗體
猴中腦星型膠質(zhì)來源神經(jīng)營養(yǎng)因子(MANF) 正辛溴化銨,八烷溴化銨連接粘附分子C抗體
猴淋巴素β(LTβ) 酮麝香(標準品)蛋白質(zhì)酪氨酸激酶JAK-1抗體
猴纖維蛋白原降解產(chǎn)物(FDP) 酰十字孢堿(PKC-412)組蛋白去化酶JMJ2A抗體
猴水通道蛋白4(AQP-4) 無水鄰菲啰啉;1,10-菲羅啉組蛋白去化酶JMJD5抗體
猴表皮生長因子受體2(EGFR2)鄰菲啰啉一水;1,10-菲羅啉一水磷酸化γ連環(huán)蛋白抗體
猴可溶性半乳糖凝集素3結合蛋白(LGALS3BP)鄰菲啰啉鹽酸鹽一水;1,10-菲羅啉鹽酸鹽JNK相互作用蛋白4抗體
細菌通用染料法qPCR試劑盒ATRN/FITC 熒光素標記吸引素抗體IgG異-β-D-硫代半乳糖苷 98%
ATX/Autotaxin/E-NPP2/FITC 熒光素標記自分泌運動因子抗體IgG健那綠B BS, Dye content 65 %
ATXN1/Ataxin 1/FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠失調(diào)癥蛋白1抗體IgG哲納爾氏染色素 Biological Stain grade
Ataxin-1(phospho Ser776)/FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化失調(diào)癥蛋白1抗體IgG雷氏曼著色劑 Histology stain grade
AU5 tag/FITC 熒光素標記AU5 tag標簽抗體IgG氯化硝四氮唑藍 98%
AU1 tag/FITC 熒光素標記抗AU1 tag標簽抗體IgG氯化硝四氮唑藍 分子生物學級
Aurora A /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠、牛、兔、馬、豬有絲分裂激酶A抗體IgG2--β-D-吡喃半乳糖苷 99%,non-animal origin
Phospho-Aurora A (p-Thr288) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化有絲分裂激酶A抗體IgG耐爾蘭 Dye content ≥75 %
反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
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