參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：流行性出血熱病毒RT-PCR試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：YS-P013412

產(chǎn)品規(guī)格：50次

產(chǎn)品分類：PCR檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。

實(shí)驗(yàn)過程：

一、試劑準(zhǔn)備

1. DNA模板

2．公司產(chǎn)品僅用于科研對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步驟

1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer             5μl

dNTP mixl                 4μl

引物1（10pM）               2μl

引物2（10PM）              2μl

Taq酶（2U/μl）            1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

加ddH2O至               50 μl

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。

3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：

1.   特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。

2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。

3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無需繁瑣的增菌過程。

4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。

5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除TIANDZ公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。

6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。

小鼠端粒酶(TE)酸（標(biāo)準(zhǔn)品）氯霉素單克隆抗體

小鼠肌腱蛋白C(TNC)36%酸（標(biāo)準(zhǔn)品）CD98重鏈抗原抗體

小鼠肌腱蛋白X(TNX)酸（HPLC,≥99.9%）鈣蛋白酶抑制蛋白抗體

小鼠畸胎瘤衍生生長(zhǎng)因子1(TDG1)Amberlite® IRP-69陽離子交換樹脂cGMP依賴性蛋白激酶1抗體

小鼠末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9(TCC C5b-9)苊烯（標(biāo)準(zhǔn)品）胞漿鈣獨(dú)立磷脂酶A2抗體

小鼠TGF-β誘導(dǎo)早期因1(TIEG1) 二烯與烯磺酸鈉的聚合物1號(hào)染色體開放閱讀框98抗體

小鼠硫氧還蛋白結(jié)合蛋白2(TBP2)二胍（標(biāo)準(zhǔn)品）COX4NB蛋白抗體

小鼠硫氧還蛋白還原酶1(TrxR1) 13-酰-9-羥巴卡丁III（標(biāo)準(zhǔn)品）腫瘤/抗原77抗體

小鼠硫氧化還原蛋白(Trx) (+)-（標(biāo)準(zhǔn)品）CD81抗體

小鼠纖溶抑制因子/凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)酸龍腦酯（標(biāo)準(zhǔn)品）輔酶Q10B抗體

小鼠凝血酶受體(TR)二氫丹參酮（標(biāo)準(zhǔn)品）因子受體樣因子1抗體

小鼠凝血酶敏感蛋白1(TSP-1) 銻標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000μg/ml,體:6.0 mol/L HCl）半胱氨酸亞磺酸脫羧酶抗體

小鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(TAT)銻標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000μg/ml,,溶劑：鹽酸）型肝炎NS2反式調(diào)節(jié)蛋白/衰老相關(guān)的因10蛋白抗體

小鼠血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)銻標(biāo)準(zhǔn)溶液（100mg/L,溶劑:1%鹽酸）固酮合成酶CYP11B2抗體

小鼠促血小板生成素抗體銻標(biāo)準(zhǔn)溶液（100mg/L(20℃), 體: 20%HCl）分裂周期蛋白8抗體

小鼠促血小板生成素受體抗體銻標(biāo)準(zhǔn)溶液（分析標(biāo)準(zhǔn)品,1.24±0.26mg/L）卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體
流行性出血熱病毒RT-PCR試劑盒IL-20R alpha/IL20RA  白介素20受體α鏈抗體鄰氨 98%

IL-20RB/IL-20R2  白介素20受體β鏈抗體3，3-二酸 99%

IL-21  白介素21抗體1-二氫茚酮 99%

IL-21R  白介素21受體抗體二酰氯 97%

IL-22  白介素-22抗體4-硝肉桂酸 98%

IL-22R  白介素-22受體抗體二酸 98%

IL-22BP/IL22RA2  白介素22受體結(jié)合蛋白抗體3,4,5-氧肉桂酸 99%

IL1RAPL1  白介素1受體相關(guān)蛋白樣1前體蛋白抗體二（2，4，6-酰）氧化膦 97%
使用方法：

一、樣品采集：

1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。

2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。

3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。

4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。

一、稀釋 PCR 陽性對(duì)照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對(duì)照。

2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（最好用帶芯槍頭，下同）。

4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用

6. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。