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規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013297 |
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品牌 | YSRIBIO |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
狼源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 | 50次 | YS-P013297 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
人叉頭框蛋白C2(FOXC2)哌立福新(KRX-0401)9號染色體開放閱讀框91抗體
人內(nèi)皮特異分子1(ESM1)鹽酸阿那格雷9號染色體開放閱讀框93抗體
人Ras相關(guān)C3肉菌素底物1(Rac1)甲磺酸沙奎拉韋9號染色體開放閱讀框96抗體
人抗生長激素抗體(GHAb) 伐三水合鹽酸鹽9號染色體開放閱讀框98抗體
人白免疫球蛋白樣受體亞家族B成員2(LILRB2)伐非三水合鹽酸鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)分裂周期蛋白5樣蛋白抗體
人催產(chǎn)素受體(OTR)抑氨肽酶,烏苯美司,貝他定,苯丁抑制素鈣粘蛋白23抗體
人蛋白二硫化物異構(gòu)酶A6(PDIA6)抑氨肽酶(進(jìn)口)色素p450 2s1抗體
人紅衍生核因子2樣蛋白2(NFE2L2)高藜蘆酸/3,4-二甲氧基角蛋白16抗體
人高密度脂蛋白(HDL)高藜蘆酸(標(biāo)準(zhǔn)品)半胱酸蛋白酶蛋白-6抗體
人抗脫氧核糖核蛋白抗體(DNP-Ab) PD0325901c-fos抗體
人乙型肝炎病表面抗原(HBsAg)西他塞坦鈉/司他生坦鈉9號染色體開放閱讀框23抗體
人基質(zhì)金屬蛋白酶原10 (Pro-MMP-10)西他塞坦鈉/司他生坦鈉9號染色體開放閱讀框25抗體
人基質(zhì)金屬蛋白酶原13 (Pro-MMP-13)西他塞坦鈉/司他生坦鈉9號染色體開放閱讀框30抗體
人信號調(diào)節(jié)蛋白α(SIRPA)輪環(huán)藤寧四乙酸/1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷-1,4,7,10-四乙酸9號染色體開放閱讀框37抗體
人血漿五聚蛋白3 (PTX 3/TSG-14)拉米夫定9號染色體開放閱讀框40抗體
人血小板衍生生長因子AA(PDGF-AA)拉米夫定(標(biāo)準(zhǔn)品)9號染色體開放閱讀框41抗體
狼源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒ChRM3 蕈堿型乙酰膽堿受體M3抗體N-芐氧羰基-L-天冬氨酸 99%
CIDEB 促進(jìn)凋亡基因抗體N-芐氧羰基-L-纈氨酸 99%
CIB1 鈣整合素結(jié)合蛋白1抗體N-芐氧羰基-L-亮氨酸 96%
C-jun 原癌基因蛋白/活化蛋白1抗體N-芐氧羰基-L-苯氨酸 98%
phospho-c-Jun/AP-1(Thr91+Thr93) 磷酸化原癌基因c-Jun抗體N-芐氧羰基-L-谷氨酸 98%
phospho-c-Jun (Ser73) 磷酸化原癌基因c-Jun抗體Fmoc-L-亮氨酸 98%
phospho-c-Jun (Ser243) 磷酸化原癌基因c-Jun抗體Fmoc-L-異亮氨酸 99%
phospho-c-Jun (Thr93) 磷酸化原癌基因c-Jun抗體Fmoc-L-精氨酸 98%
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