參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：巨大芽孢桿菌染料法qPCR試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：YS-P013646

產(chǎn)品規(guī)格：50次

產(chǎn)品分類：PCR檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：

1.   特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。

2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。

3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無需繁瑣的增菌過程。

4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。

5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除TIANDZ公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。

6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐

的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
實(shí)驗(yàn)過程：

一、試劑準(zhǔn)備

1. DNA模板

2．公司產(chǎn)品僅用于科研對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步驟

1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer             5μl

dNTP mixl                 4μl

引物1（10pM）               2μl

引物2（10PM）              2μl

Taq酶（2U/μl）            1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

加ddH2O至               50 μl

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。

3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

使用方法：

一、樣品采集：

1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。

2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。

3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。

4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。

一、稀釋 PCR 陽性對(duì)照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對(duì)照。

2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（最好用帶芯槍頭，下同）。

4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用

6. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。

猴成骨生長(zhǎng)肽(OGP) 一葉秋堿 ，一葉萩堿磷酸化抑癌蛋白EZH2抗體

猴糖化蛋白(GSP)  遠(yuǎn)志口山酮；遠(yuǎn)志山酮III組蛋白去化酶JARID1B抗體

猴凋亡蛋白酶激活因子1(APAF-1)  雷公藤定堿硫酸角質(zhì)素抗體

猴β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40) 三正丁十四烷氯化膦角質(zhì)生長(zhǎng)因子調(diào)節(jié)蛋白2抗體

猴補(bǔ)體片段3b受體(C3bR)  羅漢果皂苷ⅢA1離子通道蛋白G蛋白4抗體

猴強(qiáng)啡肽(Dyn) 羅漢果皂苷ⅡA2通道多聚體結(jié)構(gòu)域KCTD18抗體

猴磷脂爬行酶2(PLSCR2)羅漢果皂苷Ⅲe胞質(zhì)接頭蛋白Keap1

猴低氧上調(diào)節(jié)因子1(HYOU1) 羅漢果黃素舞蹈癥相關(guān)蛋白KALRN抗體

猴雄激素誘導(dǎo)蛋白1(AIG1) 紫草呋喃A內(nèi)流通道蛋白Kir4.1抗體

猴XV 型膠原(COL15) 白皮杉,3'-羥白藜蘆;比杉特(標(biāo)準(zhǔn)品)樣蛋白3抗體

猴白分化抗原CD40配體(CD40L/TNFSF5)氯化琥珀酰膽堿KLF樣轉(zhuǎn)錄因子7抗體

猴雌激素誘導(dǎo)蛋白PS2 (EIPS2)氯化琥珀酰膽堿(標(biāo)準(zhǔn)品)Kelch樣蛋白8抗體

猴凝血因子Ⅻ(F12)  多根離子通道蛋白家族KCNQ2抗體

猴集蛋白亞家族成員11(COLEC11) 氯化鎂離子通道多聚體結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體

猴TATA框結(jié)合蛋白相關(guān)因子2(TAF2)苜蓿素(標(biāo)準(zhǔn)品)通道蛋白1抗體

猴生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白2(Grb2)人參皂苷Rg5電壓門控通道蛋白1抗體
巨大芽孢桿菌染料法qPCR試劑盒BGP/FITC  熒光素標(biāo)記骨保護(hù)蛋白/骨鈣素抗體IgGD-天門冬氨酸-β-酯 BR

Bid/FITC  熒光素標(biāo)記BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白抗體IgGD-氨酸酯鹽酸鹽 BR

AQP-2/HRP (aquaporin Protein-2)  辣根過氧化物酶標(biāo)記水通道蛋白-2抗體IgGL-天門冬氨酸-β-芐酯  98%

BIN1/FITC  熒光素標(biāo)記橋連整合因子蛋白抗體IgGD-天門冬氨酸-β-芐酯 BR

Bim/FITC  熒光素標(biāo)記死亡調(diào)解子抗體IgGD-天門冬氨酸二芐酯對(duì)磺酸鹽 98%

phospho-Bim(Ser55) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化死亡調(diào)解子抗體IgGD-氨酸芐酯對(duì)磺酸鹽 98%

Bim(phospho Ser87)/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化死亡調(diào)解子抗體IgGN-酰-DL-氨酸 98%

phospho-Bim(Ser69) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化死亡調(diào)解子抗體IgGN-酰-L-氨酰 BR