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規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013651 |
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品牌 | YSRIBIO |
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
(a/b)錦鯉皰疹病毒PCR試劑盒 | 50次 | YS-P013651 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學(xué)中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
猴腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體G1(ABCG1) 黃藤素(標準品)鈣激活通道蛋白3抗體
猴降鈣素原(PCT) 鹽酸西那卡塞;鹽酸狀旁腺激素腎臟和腦蛋白抗體
猴絲狀血球凝集素(FHA) 黃藤素有絲分裂驅(qū)動蛋白樣2B抗體
猴平滑肌肌球蛋白(SMM) 鏈霉蛋白酶/鏈絲菌蛋白酶/鏈霉菌蛋白酶kelch樣蛋白9抗體
猴催產(chǎn)素受體(OTR)抗蛋白酶(進口)驅(qū)動蛋白家族成員15抗體
猴早期生長應(yīng)答蛋白1(EGR1)D-巖藻糖著絲點關(guān)聯(lián)蛋白1抗體
猴類粘蛋白2(ORM2) N-酰-DL-絲氨酸kelch樣蛋白5抗體
猴前梯度蛋白2(AGR2) 玉米素驅(qū)動蛋白家族成員C1抗體
猴血管緊張素轉(zhuǎn)化酶 (ACE)水飛薊素Kelch樣蛋白22抗體
猴白分化抗原28(CD28)水飛薊素電壓門控通道Kv4.1抗體
猴免疫球蛋白G2(IgG2)鐵蛋白酸敏感離子通道蛋白3抗體
猴表皮脂肪酸結(jié)合蛋白5(FABP5)鵝去氧膽酸(標準品)Klotho多肽蛋白抗體
猴前動力蛋白2(PK2)鵝去氧膽酸鈣激活通道蛋白4抗體
猴CD3d分子(CD3d)胰島素(牛)Kelch樣蛋白23抗體
猴c-myc癌因產(chǎn)物(c-myc) 胰島素(牛)BTB-kelch蛋白家族10抗體
猴絲氨酸/蘇氨酸激酶39(STK39) L-天門冬氨酸BTB-kelch蛋白家族4抗體
(a/b)錦鯉皰疹病毒PCR試劑盒BRMS-1/FITC 熒光素標記癌轉(zhuǎn)移抑制因1抗體IgGBOC-L-絲氨酸酯 BR
BTG2/TIS21/FITC 熒光素標記B遷移因2抗體IgGBOC-D-色氨酸 BR
Brucella/FITC 熒光素標記抗布魯氏菌抗體IgGBOC-D-亮氨酸 98%
Brucella/HRP 辣根過氧化物酶標記抗布魯氏菌抗體IgGBOC-D-甘氨酸 98%
Brucella/Biotin 生物素標記抗布魯氏菌抗體IgGBOC-L-氨 98%
BSEP/FITC 熒光素標記膽汁酸鹽輸出泵蛋白抗體IgGBOC-D-氨 BR
BSP/FITC 熒光素標記骨涎蛋白抗體IgGBOC-L-氨 BR
Goat human C3/FITC 熒光素標記羊抗人補體C3 IgGN-Boc-D-氨 98%
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
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