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當(dāng)前位置:上海研生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>原代細(xì)胞>> 大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞說(shuō)明書(shū)
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080),85%;北美胎牛血清(United States,GIBCO,貨號(hào)16000-044),15%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
公司向您推薦大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞說(shuō)明書(shū)的詳細(xì)說(shuō)明:
產(chǎn)品名稱(chēng) | 大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞說(shuō)明書(shū) |
規(guī)格 | 5×105 |
貨號(hào) | YS-X6569 |
產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織,提供的人源原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶(hù)可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類(lèi)型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。科技提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿(mǎn)50ml左右*培養(yǎng)基;2、說(shuō)明書(shū)及注意事項(xiàng);3、科技售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶(hù)可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶(hù)收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶(hù)收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
細(xì)胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng):
用于檢測(cè)細(xì)胞因子的細(xì)胞株通常培養(yǎng)于含10%小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中,培養(yǎng)對(duì)細(xì)胞因子有依賴(lài)性的細(xì)胞株時(shí)還有加入適量細(xì)胞因子。在37℃ 5% CO2 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)特性,在適當(dāng)?shù)臅r(shí)候進(jìn)行傳代,一般3~4 天傳代一次。
懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞的傳代:
直接離心后吸去培養(yǎng)上清液,用新鮮培養(yǎng)液稀釋?xiě)腋〖?xì)胞,一般按1:2-1:5 稀釋細(xì)胞后,分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
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實(shí)驗(yàn)操作步驟:
a.采用認(rèn)可的方案處死人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞嚙齒動(dòng)物。
b.立即在無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)用70%乙醇擦洗整個(gè)動(dòng)物。
c.用無(wú)菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口,用無(wú)菌鑷子將皮膚扯向后腿。
d.用另一無(wú)菌的剪刀和鑷子切開(kāi)腹部,取出含有胚胎的子宮,置于無(wú)菌的培養(yǎng)皿上。
e.剔除胚胎周?chē)陌?,將胚胎放于無(wú)菌的含有無(wú)菌PBS的100ml燒杯中。
f.漂洗胚胎,去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。
實(shí)驗(yàn)材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè); 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個(gè)
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè),細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個(gè);無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺(tái);
胰酪胨大豆多粘菌素肉湯添加劑鹽酸四環(huán)素 USP級(jí)大腸桿菌噬菌體MS2液體培養(yǎng)基pUNO1-hGSDMA
革蘭氏染色液碳酸鈷(II) CP,Co 43.0 - 47.0 %大腸桿菌噬菌體MS2半固體培養(yǎng)基pUNO1-hGSDMBc
酚紅葡萄糖肉湯碳酸鈷(II) AR,Co 43.0 - 47.0 %革蘭氏陽(yáng)性菌增菌液pUNO1-hGSDMC
無(wú)菌 L-酪氨酸懸液草酸鈷 CP,98.0%GAD培養(yǎng)基pUNO1-hGSDMD
溶菌酶營(yíng)養(yǎng)肉湯基礎(chǔ)氧化亞鈷 99.99% metals basis陰溝腸桿菌分離瓊脂(ECIA)pUNO1-hGSDMEa
培養(yǎng)基氧化亞鈷 AR結(jié)晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂(VRBGA)pUNO1-hHBXIP
溶菌酶2000 萬(wàn) IU/g三鈷 AR,99.0%慶大瓊脂pUNO1-hHCC1
0.1%溶菌酶溶液硫酸鈷,七水 AR,99.5%萬(wàn)古0.66mgpUNO1-hHDAC1
鹽肉湯化鈷,六水 ARUVM2添加劑pUNO1-hHDAC11a
無(wú)菌鹽肉湯正醇鋯 80 wt. %正醇溶液1%TTC溶液pUNO1-hHDAC2
大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞說(shuō)明書(shū)硫氰酸鉀 CP,98%Acriflavine 吖啶黃素 丫啶黃素蛋黃卵脂Porcine SOD1(Superoxide dismutase [Cu-Zn]) ELISA Kit
Porcine LN ELISA Kit
硫氰酸鈉 AR,98.5%氨芐青儲(chǔ)存液(100mg/mL)叔醇鉀Porcine T4(Thyroxine) ELISA Kit
Porcine COR(Cortisol) ELISA Kit
無(wú)水鋁 CP,≥99.0%氨芐青儲(chǔ)存液(100mg/mL)5-基煙酸Porcine FE(Ferritin) ELISA Kit
Porcine AST(Aspartate aminotransferase) ELISA Kit
酮肟 99%氨芐青儲(chǔ)存液(100mg/mL)豬去氧膽酸Porcine MMP14(Matrix metalloproteinase-14) ELISA Kit
Porcine GAL3(Galectin 3) ELISA Kit
環(huán)己烷 AR,99.5%Carbenicillin 羧芐青溶液(50mg/mL) 自產(chǎn)涼味劑 WS-3(薄荷酰胺)Porcine HMGB1(High mobility group protein B1) ELISA Kit
Porcine IL-27A(Interleukin-27 subunit alpha) ELISA Kit
環(huán)己醇 Standard for GC,>99.0% (GC)Carbenicillin 羧芐青溶液(50mg/mL) 自產(chǎn)硝唑尼特Porcine A-GHR(Acylated ghrelin) ELISA Kit
Porcine DCN(decorin) ELISA Kit
環(huán)己醇 CP,97%Chloramphenicol 溶液(50mg/mL)撲熱息痛(對(duì)酰氨基)Porcine GPX1(Glutathione peroxidase 1) ELISA Kit
Porcine PTH(Parathyroid hormone) ELISA Kit
環(huán)己醇 AR,98%Chloramphenicol 溶液(50mg/mL)靈芝粉Plant Arabidopsis thaliana Cytochrome P450 83B1(CYP83B1) ELISA Kit
Rat SCD86/B7-2(Soluble Cluster of Differentiation 41 Ligand) ELISA Kit
己內(nèi)酰胺 99%Gentamycin 慶大溶液(50mg/mL)動(dòng)物蛋白魚(yú)粉Rat CSNK2A2(Casein Kinase 2, alpha 2 Polypeptide) ELISA Kit
Rat NGAL(Neutrophil Gelatinase Associated Lipocalin) ELISA Kit
AR,97.0% (?。?/font>Gentamycin 慶大溶液(50mg/mL)氨氮去除劑Rat ACV-A(Activin A) ELISA Kit
Rat MCPIP(Monocyte Chemoattractant Protein-induced Protein 1) ELISA Kit
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