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豬圓環(huán)病毒3型探針法熒光定量PCR試劑盒

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產(chǎn)品型號50次

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2021-11-20 15:58:10瀏覽次數(shù):143次

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規(guī)格 50次 貨號 YS-P013555
品牌 YSRIBIO
豬圓環(huán)病毒3型探針法熒光定量PCR試劑盒原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。

組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)

2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液:1×20ml。

4、 檢測稀釋液A:1×10ml。

5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
服務(wù)流程:

公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

豬圓環(huán)病毒3型探針法熒光定量PCR試劑盒

50次

YS-P013555

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟

溫度

時間

循環(huán)數(shù)

預(yù)變性

94℃

5   min

1

變性

94℃

10   sec

30-40

退火

50-65℃

20   sec

30-40

延伸

72℃

30   sec/kb

30-40

終延伸

72℃

5   min

1

 

QQ截圖20191211135002.jpg 

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;

②堿基配對原則;

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學(xué)中zui小檢出率為3個細菌。

(3) 簡便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。

(4) 對標本的純度要求低

不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。

反應(yīng)五要素:

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:

①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

豬膜聯(lián)蛋白A5(ANXA5 )  D-葡萄糖酸DNA結(jié)合抑制因子2抗體

豬卵泡抑素(FST) L-4-三氟氨酸粒趨化蛋白2抗體

豬核受體相互作用蛋白1(NRIP1)L-別蘇氨酸GATA結(jié)合蛋白5抗體

c-myc癌因產(chǎn)物(c-myc) L-醋酸賴氨酸生長分化因子9抗體

β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42) L-胱氨酸二酯二鹽酸促代謝型谷氨酸受體4抗體

豬白分化抗原CD109(CD109) GSK2636771GST標簽蛋白抗體

豬周期素依賴性激酶2(CDK2) Cbz-L-蘇氨酸芐酯磷脂酰蛋白聚糖-4抗體

豬多藥耐藥相關(guān)蛋白1(MRP1)(+)-2--L-絲氨酸眼鏡蛇蛇蛋白抗體

豬和肽素(CPP) 3,3-二-L-氨酸GalNAc-T14抗體

豬抗凝血酶(AT) α--L-氨酸骨形態(tài)形成蛋白拮抗蛋白2抗體

α甘露糖苷酶(α Manase) L-天冬氨酸二酯鹽酸鹽甘油酰轉(zhuǎn)移酶4抗體

豬肌營養(yǎng)不良蛋白關(guān)聯(lián)糖蛋白1(DAG1) L-半胱氨酸酯鹽酸鹽葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白12抗體

豬突觸足蛋白(SYNPO)甘氨酸酯鹽酸鹽顆粒溶素抗體

豬果糖二磷酸縮酶C(ALDOC) L-谷氨酸二酯鹽酸鹽腦膠質(zhì)瘤相關(guān)蛋白抗體(鋅指蛋白5)

豬表皮調(diào)節(jié)素(EREG)L-亮氨酸酯鹽酸鹽生長調(diào)節(jié)致癌因gamma(GROγ)抗體

豬胰島素樣生長因子2受體(IGF2R)L-異亮氨酸酯鹽酸鹽G蛋白信號調(diào)節(jié)蛋白2抗體
豬圓環(huán)病毒3型探針法熒光定量PCR試劑盒Socs 1  因子信號傳導(dǎo)抑制蛋白1抗體2-氟  95%

Socs 2  因子信號傳導(dǎo)抑制蛋白2抗體吉拉爾特試劑T 98%

Socs 3  因子信號傳導(dǎo)抑制蛋白3抗體溴代十六烷吡啶 96%

SOD1  超氧化物歧化酶1抗體(銅/鋅過氧化物歧化酶SOD)二酸 AR,99.5%

SOD2  超氧化物歧化酶2抗體N-嗎啉 CP,98%

Solute carrier family 1  溶質(zhì)攜帶物家族-1抗體N-嗎啉 GR,99%

Somatostatin/GRIH  生長抑素抗體N-嗎啉 重蒸餾,99.5%

Sox2  胚胎干關(guān)鍵蛋白抗體N-嗎啉 用于蛋白質(zhì)測序, ≥99.8% (GC)


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