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實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,Z后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產(chǎn)品名稱 | 檳榔探針法PCR鑒定試劑盒價格 |
英文名稱 | Semen arecae |
貨號 | YSP8924 |
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使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
PCR的反應(yīng)條件:
因擴增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小,設(shè)定25~30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少,擴增量不足;如果循環(huán)次數(shù)太多,則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預(yù)備實驗可2℃間隔進(jìn)行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設(shè)定30秒~1分鐘;當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時, 時間設(shè)定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴增產(chǎn)物;Anneal溫度太低時,容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外,Extension時間太短時,會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成;而Extension時間太長時,會出現(xiàn)Smear。
腐霉利 分析標(biāo)準(zhǔn)品豬外周血淋巴細(xì)胞分離液試劑盒雌二醇(Z)anti- CD82 antibody
anti- CD82 antibody
腐霉利魚(淡水)全血淋巴細(xì)胞分離液試劑盒雌二醇(Z)anti- CD84 antibody
anti- CD86 antibody
吸油棉 300*500*4mm*60G 配套P1176還原鐵罐雞外周血造血干細(xì)胞分離液試劑盒硫酸氯吡格雷anti- CD89 antibody
anti- CD8A antibody
吸油棉200*300*4mm*24G 配套P1211還原鐵罐牛血管內(nèi)皮細(xì)胞分離液試劑盒
一水檸檬酸anti- CD8B antibody
anti- CD9 antibody
1,3-二氯烯 分析標(biāo)準(zhǔn)品大鼠骨髓干細(xì)胞分離液
輔酶Q10anti- CD9 antibody
anti- CD94 antibody
反式-1,3-二氯烯 97%Hoechst 33258染色液(即用型)亮藍(lán)色素anti- CD97 antibody
anti- CD98 antibody
1,3-二氯烯 (cis + trans), ≥92%(GC)Hoechst 33258染色液(即用型)維酸99%anti- CD99 antibody
anti- CDA1 antibody
磺酸達(dá)氟沙星 分析標(biāo)準(zhǔn)品Hoechst 33258染色液(1mg/mL)維酸99%anti- CDAN1 antibody
anti- CDC14A antibody
磺酸達(dá)氟沙星Hoechst 33258染色液(1mg/mL)肉豆蔻酸anti- CDC14B antibody
anti- CDC16/APC6 antibody
基硫酸新斯的明 98%Hoechst 33342染色液(即用型)誘紅anti- Cdc20 antibody
anti- Cdc20 antibody
檳榔探針法PCR鑒定試劑盒價格NK細(xì)胞抑制性受體3DL1抗體500mlZPA玻璃瓶真空包裝袋 280*140*0.1VEGF-C ELISA Kit 大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子CpUNO1-hSTING-S154
嗜中性粒細(xì)胞抗原CD177抗體1L玻璃瓶包裝用真空塑料袋 355*180mmVEGF-B(Human Vascular Endothelial cell Growth Factor B) ELISA KIT 人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子BpUNO1-hTIRAPb-DN
抗B淋巴細(xì)胞粘附分子CD22抗體包裝用透明PE袋 345*345*0.1mmVEGF-B ELISA Kit 大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子BpUNO1-hTLR10-DN
CD25/白介素2受體a鏈抗體100ml 注射劑瓶用透明PE袋 230*110*0.1mmVEGF(Mouse Vascular Endothelial cell Growth Factor) ELISA Kit 小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子pUNO1-hTLR01-DN
CD122/白介素2受體β鏈抗體苯并(a)蒽 98%VEGF(Human Vascular Endothelial cell Growth Factor) ELISA KIT 人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子pUNO1-hTLR02-DN
CD3抗體丹皮酚 99%VEGF ELISA KIT 大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子pUNO1-hTLR03-DN
CD33抗體(人)10-十一烯酸 95%VE(Human Vitamin E) EELISA Kit 人維生素EpUNO1-hTLR04a-DN
CD33抗體(大、小鼠)10-十一烯酸 98%VE ELISA Kit 大鼠維生素EpUNO1-hTLR05-DN
CD34抗體(細(xì)胞表面的唾液粘蛋白)己二酸二異辛酯 99%VD3(Human Vitamin D3) ELISA kit 人維生素D3pUNO1-hTLR06-DN
CD38抗體(人)己二酸二異辛酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品VD3 ELISA Kit 大鼠維生素D3pUNO1-hTLR07-DN
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