細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

公司向您推薦大鼠子宮內(nèi)膜上皮細胞的詳細說明：

產(chǎn)品描述：提供的原代細胞均來自新鮮組織，提供的人源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在技術部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度?？萍继峁┑募毎袠藴实蔫b定流程，保證細胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項；3、科技售后服務標準。

      保存和應用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞，如是新鮮原代細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研，不得用于臨床應用。
細胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)：
用于檢測細胞因子的細胞株通常培養(yǎng)于含10％小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)對細胞因子有依賴性的細胞株時還有加入適量細胞因子。在37℃ 5％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細胞生長特性，在適當?shù)臅r候進行傳代，一般3～4 天傳代一次。
懸浮生長細胞的傳代：
直接離心后吸去培養(yǎng)上清液，用新鮮培養(yǎng)液稀釋懸浮細胞，一般按1：2-1：5 稀釋細胞后，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
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實驗操作步驟： 
a．采用認可的方案處死人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞嚙齒動物。   
b．立即在無菌超凈臺內(nèi)用70％乙醇擦洗整個動物。 
c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。   
d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。   
e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。
實驗材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個； 人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺；

三糖鐵(TSI)瓊脂斜面FMOC-D-2-基苯氨酸 98%1%NaCl阿拉伯糖pUNO1-hK1-5

胰蛋白胨大豆肉湯（TSB）FMOC-L-4-溴苯氨酸 98%精氨酸雙水解酶肉湯pUNO1-hKAISO

豆粉瓊脂FMOC-L-2-溴苯氨酸 98%1%NaCl甘露糖pUNO1-hKLF4b

無菌脫纖維綿羊血FMOC-L-3,4-二苯氨酸 96%氨基酸脫羧酶對照pUNO1-hKRASb

平板計數(shù)牛奶瓊脂培養(yǎng)基FMOC-D-3,4-二苯氨酸 96%1%NaCl蔗糖pUNO1-hKringle5

培養(yǎng)基4--4’-硝基聯(lián)苯 98%鳥氨酸脫羧酶肉湯pUNO1-hKRT8b

緩沖蛋白胨水（BPW）N,N-二基-1,1,2,3,3,3-六氟胺 95%MR-VPpUNO1-hLAG3

無菌緩沖蛋白胨水（BPW）三氟磺酸鐵（II） 95%木糖-明膠培養(yǎng)基pUNO1-hLAMP2a

化鎂孔雀綠增菌液（MM）（RVS 肉湯）三氟烷磺酸銦 98%動力-鹽培養(yǎng)基pUNO1-hLBP

亮綠酚紅瓊脂三氟磺酸鑭 99%酚紅葡萄糖肉湯pUNO1-hMAP1LC3Aa

大鼠子宮內(nèi)膜上皮細胞雙(三基硅烷基)氨基鋰 1.0 M in THFDendrobium polysaccharides；鐵皮石斛多糖福美鈉Rat Asrgl1(L-asparaginase) ELISA Kit

Rat Socs1(Suppressor of cytokine signaling 1) ELISA Kit

金屬鋰粒 99.9% metals basisFructus Jujubae Extract；紅棗多糖/大棗多糖耐高溫有機硅樹脂Rat Amelx(Amelogenin, X isoform) ELISA Kit

Rat Slc31a1(High affinity copper uptake protein 1) ELISA Kit

金屬鋰棒 99.9% metals basis，棒Kalii Dehydrographolidi Succinas；穿琥寧丹參酮IIARat ACLY(ATP-citRate syhase) ELISA Kit

Rat Chat(Choline O-acetyltransferase) ELISA Kit

水質(zhì)鋰標樣 分析標準品Pachymaran；茯苓多糖2-咪唑Rat Dbh(Dopamine beta-hydroxylase) ELISA Kit

Rat Ywhaz(14-3-3 protein zeta/delta) ELISA Kit

鋰 低鈉級，99.95% metals basisPolysaccharide；靈芝多糖異戊二烯橡膠Rat Pola2(DNA polymerase alpha subunit B) ELISA Kit

Rat Th(Tyrosine Hydroxylase) ELISA Kit

金屬鋰 電池級，99.9% metals basisPolysaccharides of Lycium chinense；枸杞多糖 UV≥50%異戊二烯橡膠Rat Pnlip(Pancreatic triacylglycerol lipase) ELISA Kit

Rat Col27a1(Collagen alpha-1(XXVII)chain) ELISA Kit

鋰 高鈉級，98.5%Polysaccharides of Lycium chinense；枸杞多糖 UV≥90%諾麗果提取物Rat Mgp(Matrix Gla protein) ELISA Kit

Rat Nox4(Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate Oxidase 4) ELISA Kit

氧化鋰 99.99% metals basisPortulaca oleracea polysaccharides；馬齒莧多糖聚氧化烯Rat Otc(Ornithine carbamoyltransferase, mitochondrial) ELISA Kit

Rat5c3l(Cytosolic 5'-nucleotidase III-like protein) ELISA Kit

化鋰 97%Radix Codonopsis Polysaccharide；黨參多糖二二醇二醚Rat Glo1(Lactoylglutathione lyase) ELISA Kit

Rat Hspe1(10 kDa heat shock protein, mitochondrial) ELISA Kit

溴化鋰 CP，95%Sanqi tofal Saponins；三七總皂苷羅氟司特Rat Atp2a1(Sarcoplasmic/endoplasmic reticulum calcium ATPase 1) ELISA Kit

Rat Casq1(Calsequestrin-1) ELISA Kit