培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計數(shù)器、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用 Countess®自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C?；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

 產(chǎn)品描述：提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，提供的人源原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度?？萍继峁┑募?xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程，保證細(xì)胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項；3、科技售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。

      保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮原代細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。

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細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

胰蛋白胨葡萄糖酵母浸膏肉湯（TPGYT 基礎(chǔ)）Fmoc-D-烯基甘氨酸 96%3%NaCl鳥氨酸脫羧酶pUNO1-hIRGM

胰蛋白酶FMOC-D-3-(4-吡啶基)-氨酸 98%MR-VPpUNO1-hIRS1

厭氧卵黃瓊脂基礎(chǔ)FMOC-L-3-(3-吡啶基)-氨酸 98%1%NaCl甘露醇pUNO1-hISG20

50%卵黃鹽水懸液FMOC-L-3-(2-吡啶基)-氨酸 97%OFpUNO1-hCXCL11

明膠磷酸鹽緩沖液FMOC-D-3-(2-吡啶基)-氨酸 98%1%NaCl乳糖pUNO1-hITCHb

培養(yǎng)基FMOC-L-4-基苯氨酸 98%ONPGpUNO1-hITGA4

腸道菌增菌肉湯（EE 肉湯）FMOC-D-4-基苯氨酸 98%賴氨酸脫羧酶肉湯pUNO1-hITGB1a

改良頭孢哌酮麥康凱瓊脂（CMA）基礎(chǔ)FMOC-L-3-基苯氨酸 98%尿素酶pUNO1-hJAK1

頭孢哌酮溶液FMOC-D-3-基苯氨酸 98%1%NaCl纖維二糖pUNO1-hJAK2

三糖鐵(TSI)瓊脂FMOC-L-2-基苯氨酸 97%明膠pUNO1-hJUN

大鼠卵巢成纖維細(xì)胞規(guī)格硫酸銫 99.9%超濾離心管 96個/盒葉醇Rat Prf1(Perforin-1) ELISA Kit

Rat Ppp3r1(Calcineurin subunit B type 1) ELISA Kit

銫 AR超濾離心管 96個/盒羥基酪醇Rat Prim2(DNA primase large subunit) ELISA Kit

Rat Ppme1(Protein phosphatase methylesterase 1) ELISA Kit

苯酸鋰 99%超濾離心管 96個/盒頭孢噻呋Rat Map2(Microtubule-associated protein 2) ELISA Kit

Rat Ocm(Oncomodulin) ELISA Kit

氟化鋰  AR,99%超濾離心管 96個/盒無水化鋰Rat Eln(Elastin) ELISA Kit

Rat Nkap(NF-kappa-B-activating protein) ELISA Kit

氟化鋰  SP,光譜純超濾離心管 96個/盒4-羥基哌啶Rat Naga(Alpha-N-acetylgalactosaminidase) ELISA Kit

Rat Bax(Apoptosis regulator BAX) ELISA Kit

氟化鋰  99.99% metals basis三道定時器卡鉑Rat Cacna1a(Voltage-dependent P/Q-type calcium channel subunit alpha-1A) ELISA Kit

Rat Adcyap1(Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide) ELISA Kit

氟化鋰  CP,98.5%Angelica Polysaccharide；當(dāng)歸多糖新康唑Rat ADCY10(Adenylate cyclase type 10) ELISA Kit

Rat Kmo(Kynurenine 3-monooxygenase) ELISA Kit

氟化鋰  99.9% metals basisAstragalus flavone；黃芪黃酮硝苯地平Rat Ggt1(Gamma-glutamyltranspeptidase 1) ELISA Kit

Rat Tril(TLR4 interactor with leucine rich repeats) ELISA Kit

結(jié)晶鋰 AR,97.0%Chinese Yam polysaccharide；山藥多糖阿莫西林可溶性粉Rat Myl3(Myosin light chain 3) ELISA Kit

Rat S100A4(Protein S100-A4) ELISA Kit

雙(三基硅烷基)氨基鋰 95%Chitotetraose 4HCl；殼四糖間醛Rat Ptpn1(Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 1) ELISA Kit

Rat Lbp(Lipopolysaccharide-binding protein) ELISA Kit