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當(dāng)前位置:上海研生實(shí)業(yè)有限公司>>PCR類(lèi)>>熒光定量PCR試劑盒>> 50次河弧菌檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)
規(guī)格 | 50次 | 貨號(hào) | YS-P013909 |
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品牌 | YSRIBIO |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?,分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
河弧菌檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法) | 50T | YS-P013909 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
豚鼠神經(jīng)保護(hù)因子(CVNPF) 丁伊曲康唑軟骨蛋白39抗體
豚鼠心肌營(yíng)養(yǎng)素1(CT-1) 伊曲康唑肝癌相關(guān)蛋白2抗體(轉(zhuǎn)錄因子YY1結(jié)合蛋白1抗體)
豚鼠金屬硫蛋白1 (MT1)異伊曲康唑核酸敏感元件結(jié)合蛋白1
豚鼠可溶性CD14分子(sCD14)羥伊曲康唑y-盒結(jié)合蛋白1抗體
豚鼠促血管生成素2(ANG2)反式伊曲康唑原癌因Yes相關(guān)蛋白1抗體
豚鼠白三烯E4(LTE4) 伊曲康唑-d5磷酸化DNA結(jié)合蛋白B抗體
豚鼠白介素12 p40(IL-12 p40)酮伊曲康唑磷酸化原癌因Yes相關(guān)蛋白1抗體
豚鼠粘蛋白17(MUC17)氟康唑-d4核轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子YY1抗體
豚鼠前膠原C端肽酶(PCP) 尼羅替尼-d3磷酸化原癌因Yes相關(guān)蛋白1抗體
豚鼠核孔蛋白50kda(NUP50)7α-硫代螺內(nèi)酯-d7 (主要的)原癌因酪氨酸蛋白激酶Yes1抗體
豚鼠T受體(TCR)7α-硫代螺內(nèi)酯磷酸化原癌因酪氨酸蛋白激酶Yes1抗體
豚鼠酰膽堿酯酶(AChE) 7α-硫代螺內(nèi)酯磷酸化原癌因酪氨酸蛋白激酶Yes1抗體
豚鼠生長(zhǎng)分化因子6(GDF6)6β-羥-7α-(硫代) 螺內(nèi)酯磷酸化zeta相關(guān)蛋白70抗體
豚鼠趨化素樣因子超家族成員8(CKLFSF8)卡鉑-d4磷酸化zeta相關(guān)蛋白70抗體
豚鼠粘蛋白1(MUC1)N-氧長(zhǎng)春新堿磷酸化斑聯(lián)蛋白抗體
豚鼠β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42) 4-去酰長(zhǎng)春新堿代硫酸鹽鋅指蛋白924抗體
河弧菌檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)PI3K/P85 alpha/FITC 熒光素標(biāo)記磷脂酰肌激酶抗體IgG AR,99%
PI3K p85 (Tyr458)/p55 (Tyr199) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化磷脂酰肌激酶抗體IgG環(huán)氧氯烷 ≥99.5% (GC)
PI3 Kinase p110 delta/FITC 熒光素標(biāo)記磷脂酰肌激酶催化亞單位D抗體IgG三 Standard for GC, ≥99.5% (GC)
PIBF/FITC 熒光素標(biāo)記孕激素誘導(dǎo)阻斷因子抗體IgG三 AR,78%
PIM1/FITC 熒光素標(biāo)記前病整合位點(diǎn)蛋白1抗體IgG三 CP,75%
Phospho-PIM1(Tyr218) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化前病整合位點(diǎn)蛋白1抗體IgG三 for HPLC,>99.0% (GC)
Pin1/FITC 熒光素標(biāo)記肽脯氨酞順?lè)串悩?gòu)酶Pinl抗體IgG三 ≥99.0% (GC)
Phospho-Pin1 (Ser16)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化肽脯氨酞順?lè)串悩?gòu)酶Pinl抗體IgG三 色譜固定液,75℃+++++
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