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規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013430 |
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品牌 | YSRIBIO |
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
非洲豬瘟染料法熒光定量PCR試劑盒 | 50次 | YS-P013430 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學(xué)中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
大鼠T-框蛋白2(TBX2)叔丁(標(biāo)準(zhǔn)品)磷酸化分裂周期蛋白25C抗體
大鼠毛細血管擴張性共濟失調(diào)癥突變蛋白(ATM)對羥酸正丁酯(標(biāo)準(zhǔn)品)磷酸化周期素依賴性激酶2抗體
大鼠失調(diào)癥蛋白1(ATXN1)溴代異烷(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)膜微囊蛋白-3抗體
大鼠失調(diào)癥蛋白2(ATXN2)酸芐酯(標(biāo)準(zhǔn)品)3號染色體開放閱讀框34抗體
大鼠三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1(ABCA 1)2-溴酚(標(biāo)準(zhǔn)品)CD134抗體
大鼠三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體G1(ABC G1)鄰二酸丁芐酯(標(biāo)準(zhǔn)品)單核趨化蛋白5抗體
大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1 (TGF-β1) 鄰二酸丁芐酯標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑:)髓鞘相關(guān)糖蛋白CD57抗體
大鼠軸蛋白抑制蛋白2(AXIN2)聯(lián)菊酯(標(biāo)準(zhǔn)品)角蛋白13抗體
大鼠成纖維生長因子4(FGF4)聯(lián)菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=3%,體:石油)白免疫球蛋白樣受體-B抗體
大鼠成纖維生長因子6(FGF6)芐嘧磺隆(標(biāo)準(zhǔn)品)CD33L抗體
大鼠成纖維生長因子9(FGF9)草除靈(標(biāo)準(zhǔn)品)角蛋白10抗體
大鼠堿性成纖維生長因子(bFGF/FGF2)仲丁(標(biāo)準(zhǔn)品)軸突生長因子CD108抗體
大鼠B活化因子受體(BAFFR)聯(lián)(標(biāo)準(zhǔn)品)唾液酸結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集素5抗體
大鼠B淋巴瘤因子10(BCL-10)聯(lián)標(biāo)準(zhǔn)溶液(10.0ug/ml,體:)CD329抗體
大鼠B淋巴瘤因子3(BCL-3)正丁酸(標(biāo)準(zhǔn)品)嗜酸粒趨化蛋白14抗體
大鼠B淋巴瘤因子2(BCL-2)4-溴聯(lián)(標(biāo)準(zhǔn)品)1號染色體開放閱讀框57抗體
非洲豬瘟染料法熒光定量PCR試劑盒mu Opioid receptor µ-型阿片受體抗體硫代酸銨 試劑級,70%溶液
Phospho-mu Opioid Receptor (Ser375) 磷酸化µ-型阿片受體抗體硫代酸 CP,85.0%
Delta Opioid Receptor D型阿片受體抗體鄰二酸二異辛酯 CP,98%
Phospho-delta Opioid Receptor (Ser363) 磷酸化D型阿片受體抗體鄰二酸二辛酯 GR
KLK3 激肽釋放酶3/舒血管素3抗體鄰二酸二異辛酯 AR,99%
KLK4 激肽釋放酶4抗體鄰二酸二異辛酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品, ≥99.5% (GC)
KLK7 激肽釋放酶7抗體鄰二酸二異辛酯 標(biāo)準(zhǔn)溶液1000μg/ml,溶劑:
KLK9 激肽釋放酶9抗體鄰二酸二異辛酯 標(biāo)準(zhǔn)溶液500μg/ml,溶劑:
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
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