參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：立克次體檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）
產(chǎn)品貨號(hào)：YS-P013998

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品分類：PCR檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。

實(shí)驗(yàn)過程：

一、試劑準(zhǔn)備

1. DNA模板

2．公司產(chǎn)品僅用于科研對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步驟

1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer             5μl

dNTP mixl                 4μl

引物1（10pM）               2μl

引物2（10PM）              2μl

Taq酶（2U/μl）            1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

加ddH2O至               50 μl

視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。

2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。

3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：

1.   特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。

2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。

3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無(wú)需繁瑣的增菌過程。

4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。

5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除TIANDZ公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。

6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。

雞趨化素樣因子超家族成員5(CKLFSF5)PE-Cy7標(biāo)記的兔抗羊IgG

雞白分化抗原CD109(CD109) Cy3標(biāo)記的兔抗羊IgG

雞軟骨糖蛋白39(GP39) Cy5標(biāo)記的兔抗羊IgG

雞血小板反應(yīng)蛋白2(TSP-2) Cy5.5標(biāo)記的兔抗羊IgG

雞天青殺素1(AZU1)  Cy7標(biāo)記的兔抗羊IgG

雞白介素3介導(dǎo)核因子(NFIL3)生物素標(biāo)記的兔抗羊IgG

雞胃蛋白酶原C(PGC)羅丹明標(biāo)記的兔抗羊IgG

雞性別決定區(qū)Y框蛋白2(SOX2)堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的兔抗羊IgG

雞谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶θ1(GSTθ1/GSTt1)FITC標(biāo)記的兔抗羊IgG

雞補(bǔ)體因子I(CFI)膠體金標(biāo)記的兔抗羊IgG

雞半乳糖6硫酸酯酶(Gal-6S)  羅丹明標(biāo)記的兔抗羊IgM

雞蛋白(NPHN)FITC標(biāo)記的兔抗羊IgM

雞補(bǔ)體成分4a(C4a)堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的兔抗羊IgM

雞特異性抗原2(SSFA2)膠體金標(biāo)記的兔抗羊IgM

雞早期生長(zhǎng)應(yīng)答蛋白1(EGR1)Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗羊IgM

雞凝血因子V(F5)  APC標(biāo)記的兔抗羊IgM
立克次體檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）TRF/Gold  金離子標(biāo)記抗轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體IgGL-亮氨酸酯鹽酸鹽 98%

CD8/PE  熒光素藻紅蛋白標(biāo)記兔抗人、大、小鼠CD8抗體IgGD-賴氨酸鹽酸鹽 98%

VWF/PE  熒光素PE標(biāo)記血管性血友病因子抗體IgGD-亮氨酸 99%

factor VIII/PE  熒光素PE標(biāo)記第八因子相關(guān)抗原抗體IgGN(e)-Boc-L-賴氨酸 97%

Annexin V/PE  熒光素PE標(biāo)記兔抗人、大、小鼠、Annexin V抗體IgG亮抑酶酞 ≥90% (HPLC

CD184/CXC-R4/PE  熒光素PE標(biāo)記表面趨化因子受體4抗體IgGL-亮氨酸芐酯對(duì)磺酸鹽 98%

CD64/PE  熒光素PE標(biāo)記免疫球蛋白G Fc段受體ID-亮氨酸酯鹽酸鹽 98%

WBSCR14/ChREBP /FITC  熒光素標(biāo)記糖類應(yīng)答元件結(jié)合蛋白ChREBP抗體IgGD-亮氨酸芐酯對(duì)磺酸鹽 98%
使用方法：

一、樣品采集：

1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。

2、血液樣品：用無(wú)菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無(wú)菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。

3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。

4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。

一、稀釋 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。

2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（最好用帶芯槍頭，下同）。

4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用

6. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。