當前位置:上海研生實業(yè)有限公司>>PCR類>>熒光定量PCR試劑盒>> 50次漢灘型漢坦病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒
規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013378 |
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品牌 | YSRIBIO |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
漢灘型漢坦病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 50次 | YS-P013378 |
PCR反應鑒定——PCR反應條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
小鼠成纖維生長因子受體底物3(FRS3)二二(>98%,BR)卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白125抗體
小鼠纖調(diào)蛋白(FMOD)亞硝酸二環(huán)己(>98%,BR)卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白50抗體
小鼠纖連蛋白富亮氨酸跨膜蛋白2(FLRT2)馬來酸二乙酯(>98%,BR)卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白90A抗體
小鼠纖連蛋白(FN)硫酸乙酯(>98%,BR)卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白71抗體
小鼠細絲蛋白A(FLNa)二氫松弛素(>98%,BR)卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白37抗體
小鼠FMS樣酪氨酸激酶3(Flt3) 二異辛(>98%,BR)卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白47抗體
小鼠粘著斑激酶(FAK)碳酸二甲酯(>99%,BR)卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體
小鼠促卵泡素(FSH)間苯二甲酸二甲酯(>99%,BR)卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白58抗體
小鼠卵泡抑素(FST)馬來酸二甲酯(>98%,BR)卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白94抗體
小鼠叉頭框蛋白P3(FXOP3)草酸二甲酯(>98%,BR)卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白82抗體
小鼠甲酰肽受體2(FPR2)丁二酸二甲酯(>99%,BR)CDK5激活結(jié)合蛋白2抗體
小鼠趨化因子Fractalkine(FK)二甲酮鈉鹽(>97%,BR)CDK2相互作用蛋白抗體
小鼠谷氨酸脫羧酶自身抗體IgM(GAD-Ab-IgM)N,N-二異基乙(>98%,BR)周期蛋白依賴性激酶14抗體
小鼠游離睪酮(F-TESTO)二苯烷(>98%,BR)癌胚抗原相關(guān)粘附分子19抗體
小鼠游離甲狀腺素(fT4)二苯甲(>98% (HPLC),BR)先天性紅生成異常性貧血蛋白1抗體
小鼠游離狀腺原氨酸(fT3)直接藍71(≥50%,BR)癌胚抗原相關(guān)粘附分子16抗體
漢灘型漢坦病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒matrix protein 2 (H1N1) 甲型流感病M2抗體 CP(劇品)
H1N1, Matrix Protein-2 A型豬流感病H1N1-M2蛋白抗體黃磷 CP(劇品)
Influenza A Virus Hemagglutinin 甲型流感病血凝素抗體哌啶 AR,99.5%(劇品)
Influenza A Virus Hemagglutinin 甲型流感病血凝素抗體哌啶 CP(劇品)
Hemagglutinin (H2N2) 流感病血凝素抗體(H2N2)哌啶 Standard for GC, ≥99.5% (GC)
Histone H2A 組蛋白H2AX抗體2,6-吡啶二羰酰氯 96%
Phospho-Histone H2A.X (Ser139) 磷酸化組蛋白H2AX抗體亞硝基鐵 CP
Histone H2B 組蛋白H2B抗體醌氫醌 97%
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