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規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013633 |
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品牌 | YSRIBIO |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
服務流程:
公司產品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數據分析——結果交付——售后服務。
產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
海魚分枝桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 50次 | YS-P013633 |
PCR反應鑒定——PCR反應條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數 |
預變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
猴髓鞘堿性蛋白(MBP)5(6)-ROX ;5(6)-羧-X-羅丹明鹽酸鹽有絲分裂相關蛋白INSC抗體
猴絲氨酸蛋白酶23(PRSS23)吲哚-2-酸磷酸化核因子NFκB抑制蛋白激酶i抗體
猴骨成型蛋白10(BMP-10) 5-羥-2-金剛烷酮RAN結合蛋白7抗體
猴蛋白磷酸酶(PP)右抗人γ-鏈
猴核因子相關κB結合蛋白 (NFRκB)右佐(標準品)免疫球蛋白超家族成員B抗體
猴黏膜地址素黏附分子(MAdCAM1)醋酸曲安奈德六磷酸肌激酶3抗體
猴信號識別顆粒(SRP9) 常山酮 干擾素kappa蛋白抗體
猴泛素結合酶E2A(UBE2A) 戈米辛D(標準品)白介素1α/IL-1α抗體
猴嗜酸粒趨化因子(ECF/CCL11)1-白介素1α/IL-1α抗體
猴周期素依賴性激酶1(CDK1) 6-羧-X-羅丹明磷酸化白介素2受體β鏈抗體
猴克拉拉蛋白(CC16) 西侖吉肽胰島素樣蛋白3抗體
猴血管緊張素I(ANG I) AV-951內質網核信號轉導蛋白a1抗體
猴外質蛋白1(ECM1)7,8-二氫生物蝶呤重組人白介素18抗體
猴皮膚T虜獲趨化因子(CTACK) 整形素α胰蛋白酶重鏈H4抗體
猴膽囊收縮素/腸促胰酶肽A受體(CCKAR) 柳氮磺吡啶免疫球蛋白結合蛋白-1抗體
猴封閉蛋白9(CLDN9) 帕拉米韋三水合物胰島素樣生長因子酸不穩(wěn)定亞ALS抗體
海魚分枝桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒AR Alpha1/FITC 熒光素標記α1腎上腺素能受體抗體IgG1-萘酸 96%
ARC/FITC 熒光素標記ARC抗體IgG1-萘酸 分析標準品
ARF6/FITC 熒光素標記ADP核糖化因子6抗體IgG1-萘酸(NAA) for plant cell culture, ≥96%
arfaptin 1/FITC 熒光素標記ADP核糖化因子結合蛋白1抗體IgG反-玉米素 98%
arfaptin 2/FITC 熒光素標記ADP核糖化因子結合蛋白2抗體IgG羅硝唑-同位素 分析標準品
arfaptin 2(phospho S260) /FITC 熒光素標記磷酸化ADP核糖化因子結合蛋白2抗體IgG三氯咪唑亞砜 分析標準品
ARHI/FITC 熒光素標記ARHI蛋白抗體IgGJJ5000電子天平 量程5000G,分辨率0.1G
ARIP2a/FITC 熒光素標記激活素受體2A/激活素受體相互作用蛋白2a抗體IgG一次性乳膠手套 乳膠,無粉 100只/盒
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