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當(dāng)前位置:上海研生實(shí)業(yè)有限公司>>PCR類>>熒光定量PCR試劑盒>> 50T轉(zhuǎn)基因植物PAT基因檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | YS-P014520 |
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品牌 | YSRIBIO |
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
轉(zhuǎn)基因植物PAT基因檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法) | 50T | YS-P014520 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
西尼地平英文名稱: Ketanserin Tartrate脊索生成素樣蛋白1抗體包裝5g
纈沙坦英文名稱: Ketoconazole神經(jīng)誘導(dǎo)胚胎發(fā)育相關(guān)蛋白Churchill抗體包裝25g
鹽酸阿米洛利英文名稱: Ketoconazole二氫嘧啶酶相關(guān)蛋白3抗體包裝5g
鹽酸艾司洛爾英文名稱: Kitasamycin轉(zhuǎn)錄激活蛋白CRSP9抗體包裝1g
鹽酸酮英文名稱: Latanoprost神經(jīng)網(wǎng)蛋白CopineVI抗體包裝5g
鹽酸巴尼地平英文名稱: Lenalidomide腦型肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1C抗體包裝1g
鹽酸貝那普利/苯那普利英文名稱: Lenalidomide補(bǔ)體因子B抗體包裝25g
鹽酸貝尼地平英文名稱: Letrozole乙酰膽堿受體前體蛋白AChRα1抗體包裝5g
鹽酸地爾硫卓英文名稱: Letrozole豬瘟病包膜糖蛋白E2抗體包裝100g
鹽酸丁咯地爾英文名稱: Leuprorelin Acetate (Leuprolide Acetate)冷休克結(jié)構(gòu)域蛋白C2抗體包裝25g
鹽酸多巴酚丁英文名稱: Levetiracetam碳酸酐酶10抗體包裝500g
鹽酸桂利英文名稱: LevetiracetamL選擇素抗體包裝100g
鹽酸決奈達(dá)隆英文名稱: Lincomycin HCl致癌基因C-Myc抗體包裝25g
鹽酸喹那普利英文名稱: Lincomycin HCl膽囊收縮素8抗體包裝500g
鹽酸拉貝洛爾英文名稱: Liothyronine sodium上皮鈣粘附分子抗體包裝5MG
轉(zhuǎn)基因植物PAT基因檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)F VIII Ag ELISA Kit 大鼠第八因子相關(guān)抗原反式-2-己烯 98%
M2-PK ELISA Kit 大鼠酮酸激酶M2型同工酶4-三氟水楊酸 98%
AChRab ELISA Kit 大鼠酰膽堿受體抗體2-硝-4-三氟酸 99%
GABA ELISA Kit 大鼠γ氨丁酸對(duì)二 98%
5-HT ELISA Kit 大鼠5羥色1,4-亞二酸 97%
SP-R ELISA Kit 大鼠P物質(zhì)受體4-三氟硫代酰 98%
SP ELISA Kit 大鼠P物質(zhì)3-(三氟) 98%
AFU ELISA Kit 大鼠αL巖藻糖苷酶間-三氟 98%
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
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