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上海研生實(shí)業(yè)有限公司
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轉(zhuǎn)基因植物PAT基因檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)

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產(chǎn)品型號(hào)50T

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時(shí)間:2021-11-21 19:49:53瀏覽次數(shù):183次

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規(guī)格 50T 貨號(hào) YS-P014520
品牌 YSRIBIO
轉(zhuǎn)基因植物PAT基因檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。

服務(wù)流程:

公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號(hào)

轉(zhuǎn)基因植物PAT基因檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)

50T

YS-P014520

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟

溫度

時(shí)間

循環(huán)數(shù)

預(yù)變性

94℃

5   min

1

變性

94℃

10   sec

30-40

退火

50-65℃

20   sec

30-40

延伸

72℃

30   sec/kb

30-40

終延伸

72℃

5   min

1

組成及試劑配制:

1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)

2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液:1×20ml。

4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。

5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
QQ截圖20191211135002.jpg

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;

②堿基配對(duì)原則;

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。

(3) 簡(jiǎn)便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。

(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

西尼地平英文名稱: Ketanserin Tartrate脊索生成素樣蛋白1抗體包裝5g

纈沙坦英文名稱: Ketoconazole神經(jīng)誘導(dǎo)胚胎發(fā)育相關(guān)蛋白Churchill抗體包裝25g

鹽酸阿米洛利英文名稱: Ketoconazole二氫嘧啶酶相關(guān)蛋白3抗體包裝5g

鹽酸艾司洛爾英文名稱: Kitasamycin轉(zhuǎn)錄激活蛋白CRSP9抗體包裝1g

鹽酸酮英文名稱: Latanoprost神經(jīng)網(wǎng)蛋白CopineVI抗體包裝5g

鹽酸巴尼地平英文名稱: Lenalidomide腦型肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1C抗體包裝1g

鹽酸貝那普利/苯那普利英文名稱: Lenalidomide補(bǔ)體因子B抗體包裝25g

鹽酸貝尼地平英文名稱: Letrozole乙酰膽堿受體前體蛋白AChRα1抗體包裝5g

鹽酸地爾硫卓英文名稱: Letrozole豬瘟病包膜糖蛋白E2抗體包裝100g

鹽酸丁咯地爾英文名稱: Leuprorelin Acetate (Leuprolide Acetate)冷休克結(jié)構(gòu)域蛋白C2抗體包裝25g

鹽酸多巴酚丁英文名稱: Levetiracetam碳酸酐酶10抗體包裝500g

鹽酸桂利英文名稱: LevetiracetamL選擇素抗體包裝100g

鹽酸決奈達(dá)隆英文名稱: Lincomycin HCl致癌基因C-Myc抗體包裝25g

鹽酸喹那普利英文名稱: Lincomycin HCl膽囊收縮素8抗體包裝500g

鹽酸拉貝洛爾英文名稱: Liothyronine sodium上皮鈣粘附分子抗體包裝5MG
轉(zhuǎn)基因植物PAT基因檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)F VIII Ag ELISA Kit  大鼠第八因子相關(guān)抗原反式-2-己烯 98%

M2-PK ELISA Kit  大鼠酮酸激酶M2型同工酶4-三氟水楊酸 98%

AChRab ELISA Kit  大鼠酰膽堿受體抗體2-硝-4-三氟酸 99%

GABA ELISA Kit  大鼠γ氨丁酸對(duì)二 98%

5-HT ELISA Kit  大鼠5羥色1,4-亞二酸 97%

SP-R ELISA Kit  大鼠P物質(zhì)受體4-三氟硫代酰 98%

SP ELISA Kit  大鼠P物質(zhì)3-(三氟) 98%

AFU ELISA Kit  大鼠αL巖藻糖苷酶間-三氟 98%
反應(yīng)五要素:

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:

①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。


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