原代細(xì)胞傳代次數(shù)—傳代次數(shù)是指對一個細(xì)胞系進行分批傳代的頻度(通常在一個實驗室范圍內(nèi))。某些細(xì)胞系相比較其他細(xì)胞系而言較不穩(wěn)定，可能會隨著培養(yǎng)時間的延長而改變，視不同的細(xì)胞系和培養(yǎng)條件而定。因此名稱相同的同一細(xì)胞系在生理學(xué)和形態(tài)學(xué)(以及轉(zhuǎn)染能力)性質(zhì)也可能會有很大的差異。一般而言，細(xì)胞在凍存復(fù)蘇后的一兩代之內(nèi)或直到它們*復(fù)蘇之前都很難轉(zhuǎn)染。細(xì)胞數(shù)量(融合率)——只要培養(yǎng)基質(zhì)(組織培養(yǎng)皿)尚有空間，細(xì)胞就會按指數(shù)規(guī)律分裂。對于正常細(xì)胞而言，細(xì)胞生長的速度受細(xì)胞密度大小的抑制(接觸抑制)，但癌細(xì)胞則不受此限制而會繼續(xù)生長并可互相疊加。營養(yǎng)物質(zhì)的耗竭以及代謝廢物的積聚會影響所有的細(xì)胞生長。細(xì)胞會因受到營養(yǎng)物質(zhì)匱乏的壓力而不適于轉(zhuǎn)染。報告基因的表達率與轉(zhuǎn)染開始時的細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞健康以及細(xì)胞溶解之前的生長情況相關(guān)。

培養(yǎng)物污染——培養(yǎng)物可被細(xì)菌、酵母、真菌、病毒、支原體、甚至其他細(xì)胞種類所污染。各種污染都會導(dǎo)致產(chǎn)生錯誤的結(jié)果。支原體污染——支原體污染在所有培養(yǎng)細(xì)胞中的比例為5-35%，它可改變細(xì)胞生長特性，酶的作用途徑，細(xì)胞膜的組成，染色體結(jié)構(gòu)，以及轉(zhuǎn)染效率。特別是，原代細(xì)胞支原體對采用脂質(zhì)、DEAE-右旋糖酐、磷酸鈣或腺病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)有所干擾，其結(jié)果致使非典型轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)染效率偏低。這些影響會導(dǎo)致實驗結(jié)果的不可靠以及時間和珍貴細(xì)胞系的損失。和細(xì)菌及真菌不同，支原體污染無法通過視覺檢查發(fā)現(xiàn)。它們非常小甚至能夠通過大多數(shù)的無菌濾膜;它們還對常用抗生素有抗藥性。所以必需進行支原體污染的常規(guī)篩查。
 白介素2IgG    小鼠橫紋肌輔肌動蛋白α (sm Actinin-α)
 白介素2受體γ鏈IgG    小鼠黑色素(MC Ab)
 白介素31受體aIgG    小鼠核因子κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)
 白介素32IgG    小鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)
 白介素33IgG    小鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體γ( PPAR-γ)
 白介素33IgG    小鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α) 
 白介素3IgG    小鼠過敏毒素/補體片斷4a(C4a)
 白介素3受體a鏈IgG    小鼠骨粘連蛋白(ON)
 白介素4IgG    小鼠骨形成蛋白6(BMP-6) 
 白介素5IgG    小鼠骨形成蛋白(BMPs) 
原代細(xì)胞