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纖維素含量(CLL)測(cè)試盒樣品收集、處理及保存方法:
1)血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 乾思細(xì)胞
2)血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3)細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4)組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
5)保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
測(cè)定意義:
纖維素是由葡萄糖組成的大分子多糖,通常與半纖維素、果膠和木質(zhì)素結(jié)合在一起,是植物細(xì)胞壁的主要結(jié)構(gòu)成分。纖維素是一種重要的膳食纖維,是自然界中分布含量最多的一種多糖。
測(cè)定原理:
纖維素為β-葡萄糖殘基組成的多糖,在酸性條件下加熱能分解成β-葡萄糖。β-葡萄糖在強(qiáng)酸作用下,可脫水生成β-糠醛類(lèi)化合物。β-糠醛類(lèi)化合物與蒽酮脫水縮合,生成糠醛衍生物。顏色的深淺可間接定量測(cè)定纖維素含量。
需自備的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、80%乙醇、、濃硫酸(不允許快遞)、研缽和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶(棕色),4℃避光保存。臨用前加入667μL無(wú)水乙醇,蓋緊后充分混勻,再加入9.333 mL蒸餾水混勻,避光保存。
試劑四:粉劑×1管,4℃避光保存。臨用前加1 mL蒸餾水,充分溶解。
標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1瓶,臨用前加10 mL蒸餾水,充分溶解。1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液,4℃避光保存。
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