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培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁的原因和解決方法

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培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁可能原因
(1)胰蛋白酶消化過度
(2)支原體污染
(3)培養(yǎng)瓶瓶底不干凈
(4)培養(yǎng)液pH值過堿(NaHCO3分解)
(5)消化液或培養(yǎng)液配制錯誤、過期儲存、儲存不當(dāng)
(6)細(xì)胞老化(如傳代前細(xì)胞已匯合導(dǎo)致失去貼附性)
(7)接種細(xì)胞起始濃度太低或太高
建議解決方法
(1)縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度。
(2)分離培養(yǎng)物,檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物。
(3)注意刷洗,或換用一次性塑料培養(yǎng)瓶
(4)使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2(將培養(yǎng)液敞口放入培養(yǎng)箱也可)
(5)重新配置消化液或培養(yǎng)液
(6)啟用新的保種細(xì)胞
(7)調(diào)節(jié)接種細(xì)胞濃度

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