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大鼠elisa試劑盒常用的辦法的優(yōu)缺陷

時間:2018-8-27閱讀:114
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      大鼠elisa試劑盒是一種廣泛應用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫剖析技能。酶聯(lián)免疫吸附實驗的規(guī)范程序,通常是把蛋白、抗體、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗體(capture Ab)固定在固相載體上,再參加一級檢測抗體(primarydetection Ab),形成一個抗原抗體的復合物。假如該抗體現(xiàn)已用酶(enzyme)符號了,即可用來直接測定抗原的量,若無,則可使用另一個酶符號的二級抗體來測定抗原的量。測定抗原量的辦法是參加該酶的底質(zhì)(substrate),作用后發(fā)作呈現(xiàn)的色彩深淺和樣本中的抗原量呈正比的,依此原理計算出樣本中的抗原總量或濃度。信任經(jīng)常用elisa試劑盒做實驗的科研朋友都知道,有四種常用的辦法來檢測,分別是直接法、間接法、雙抗體夾心法和競賽法及*新ELISA技能--依據(jù)細胞法。
3.新ELISA技能--依據(jù)細胞法(cell-based ELISA)
依據(jù)細胞法是一種新的定性蛋白檢測技能,將細胞直接在微孔板里培育,待檢測時,不需抽提蛋白和裂解細胞,便可直接丈量微孔板里蛋白經(jīng)影響或抑制作用后的改變。
優(yōu)勢:無需裂解細胞,所以方針蛋白丟失*少,可測定完好細胞、黏附細胞、還有非粘附細胞。
缺陷:不能測定抗原量。
1.直接法(direct ELISA)
將抗原直接固定在固相載體上,參加酶符號的一級抗體,即可測定抗原總量,此一級抗體的特異性非常重要。
優(yōu)勢:操作手續(xù)簡短,因無須使用二抗可防止交互反響。
缺陷:實驗中的一抗都得用酶符號,但不是每種抗體都適合做符號,費用相對提高。
2.間接法(indirect ELISA)
此測定辦法與直接法相似,不同在于一級抗體沒有酶符號,改用酶符號的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。
優(yōu)勢:二抗能夠加強信號,并且有多種挑選能做不同的測定剖析。不加酶符號的一級抗體則能保存它*多的免疫反響性。
缺陷:交互反響發(fā)作的機率較高。

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