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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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人永生化表皮細(xì)胞;HaCaT操作步驟

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更新時(shí)間:2017-05-16 14:24:54瀏覽次數(shù):123次

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細(xì)胞名稱      人永生化表皮細(xì)胞;HaCaT操作步驟
形態(tài)特性       上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性      貼壁生長(zhǎng)
特征特性       該細(xì)胞源自一位62歲患有黑色素瘤男性的病灶外圍正常皮膚,角蛋白、角化細(xì)胞交聯(lián)外膜蛋白、中間絲相關(guān)蛋白陽(yáng)性。 
培養(yǎng)條件       MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  15%FBS
傳代方法       1:10~1:20傳代,每周換液2~3次
傳代情況      C2
凍存條件       基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè)      培養(yǎng)法(-)
STR       Amelogenin:X;CSF1PO:9,11;D13S317:10,12;D16S539:9,12;D18S51:12;D19S433:13,14;D21S11:30.2;D2S1338:17,25;D3S1358:16;D5S818:12;D7S820:9,11;D8S1179:14;FGA:24;TH01:9.3;TPOX:11,12;vWA:16,17,OL;
同工酶      
染色體       72~88
使用權(quán)限      A類 
人永生化表皮細(xì)胞;HaCaT操作步驟細(xì)胞培養(yǎng)
1、冷凍管應(yīng)如何解凍?
取出冷凍管后, 須立即放入37 ℃水槽中快速解凍, 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化, 并注意水面不可超過(guò)冷凍管蓋沿, 否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí), 必須注意安全, 預(yù)防冷凍管之爆裂。
2、細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí), 是否應(yīng)馬上去除DMSO?
除少數(shù)特別注明對(duì)DMSO 敏感之細(xì)胞外, 絕大部分細(xì)胞株(包括懸浮性細(xì)胞), 在解凍之后, 應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中, 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可, 如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)或貼附之問(wèn)題。
3、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?
不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基, 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基, 細(xì)胞大都無(wú)法立即適應(yīng), 造成細(xì)胞無(wú)法存活。
4、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?
不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源, 所以血清的種類和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來(lái)自不同物種的血清, 在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無(wú)法存活。
人永生化表皮細(xì)胞;HaCaT操作步驟復(fù)蘇操作要點(diǎn):
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過(guò)Z易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
公司細(xì)胞庫(kù)細(xì)胞株種類齊全:大鼠腹水癌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、耐藥細(xì)胞株,如:人滑膜細(xì)胞,人胃癌細(xì)胞,人細(xì)胞,人腎近曲小管上皮細(xì)胞,肝癌細(xì)胞,心肌細(xì)胞,子宮內(nèi)膜細(xì)胞等。細(xì)胞狀態(tài)良好,飽滿,光澤度好,*,專業(yè)技術(shù)指導(dǎo),另有細(xì)胞培養(yǎng)類產(chǎn)品胎牛血清、小牛血清、DMSO、雙抗、胰酶、DMEM、1640培養(yǎng)基、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等產(chǎn)品。歡迎廣大科研用戶!
總膽汁酸(TBA)ELISA試劑盒    ,英文名:    TBA ELISA Kit
自然殺傷細(xì)胞(NK)ELISA試劑盒    ,英文名:    NK ELISA Kit
自然抗性相關(guān)巨噬細(xì)胞蛋白2(NRAMP-2)ELISA試劑盒    ,英文名:    NRAMP-2 ELISA Kit
自然抗性相關(guān)巨噬細(xì)胞蛋白1(NRAMP-1)ELISA試劑盒    ,英文名:    NRAMP-1 ELISA Kit
樁蛋白(Pax)ELISA試劑盒    ,英文名:    Pax ELISA Kit
轉(zhuǎn)移因子(TF)ELISA試劑盒    ,英文名:    TF ELISA Kit
轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)ELISA試劑盒    ,英文名:    TFR/CD71 ELISA Kit
轉(zhuǎn)錄中介因子1-β(TRIM28/KAP1/RNF96/TIF1B)ELISA試劑盒    ,英文名:    TRIM28/KAP1/RNF96/TIF1B ELISA Kit
轉(zhuǎn)錄因子抗體-1(ATF-1)ELISA試劑盒    ,英文名:    ATF-1 ELISA Kit
轉(zhuǎn)錄因子SOX-5(SOX5)ELISA試劑盒    ,英文名:    SOX5 ELISA Kit
轉(zhuǎn)錄因子SOX-4(SOX4)ELISA試劑盒    ,英文名:    SOX4 ELISA Kit
轉(zhuǎn)錄因子1(AP-1)ELISA試劑盒    ,英文名:    AP-1 ELISA Kit
轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(TTR)ELISA試劑盒    ,英文名:    TTR ELISA Kit

垂枝石松Lycopodium phlegmaria    α-Onocerol    芒柄蠟素    511-01-3    C30H50O2    ≥98%
垂枝石松Lycopodium phlegmaria    Phlegmanol C    馬尾杉醇 C    1260-05-5    C32H52O3    ≥95%
垂枝石松Lycopodium phlegmaria    Serratriol    山芝烯三醇    13956-52-0    C30H50O3    ≥95%
垂盆草Sedum sarmentosum    (-)-N-Methylsedridine    (-)-N-甲基石榴堿    41447-15-8    C9H19NO    ≥95%
垂盆草Sedum sarmentosum    (+)-N-Methylallosedridine     (+)-N-甲基石榴堿; (alphaS,2R)-alpha,1-二甲基-2-哌啶乙醇    41447-16-9    C9H19NO    ≥95%
垂盆草Sedum sarmentosum    13(18)-Oleanen-3-ol    13(18)-齊墩果烯-3-醇    508-04-3    C30H50O    ≥90%
垂盆草Sedum sarmentosum    13(18)-Oleanen-3-one    13(18)-齊墩果烯-3-酮 / Α-香樹(shù)脂酮    20248-08-2    C30H48O    ≥98.5%
人永生化表皮細(xì)胞;HaCaT操作步驟垂盆草Sedum sarmentosum    Sarmentosin    垂盆鈔草甙(治肝炎藥),垂盆草甙    71933-54-5    C11H17NO7    ≥95%
穿心蓮 Andrographis Paniculata Nees    Dehydroandrographolide    脫水穿心蓮內(nèi)酯    134418-28-3    C20H28O4    ≥98%

 

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