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人胚腎細(xì)胞;2V6.11操作步驟

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更新時(shí)間:2017-05-16 15:07:23瀏覽次數(shù):277次

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細(xì)胞名稱      人胚腎細(xì)胞;2V6.11操作步驟
形態(tài)特性       上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性      貼壁生長(zhǎng)
特征特性       這株細(xì)胞是2001年從人胚腎細(xì)胞株293衍化而來(lái)。293細(xì)胞用攜帶Zeocin-抗性標(biāo)記的質(zhì)粒pVgRXR轉(zhuǎn)染得到293pVgRXR細(xì)胞。 隨后, 用包含編碼E4 24K的Ad5 E4 ORF6基因的質(zhì)粒pEKORF6轉(zhuǎn)染。pEKORF6從包含潮霉素抗性基因的質(zhì)粒pIndHydro衍生而來(lái)。 載體包含SV40病毒序列。 2V6.11細(xì)胞株Z初從含潮霉素的培養(yǎng)液中用克隆環(huán)分離單克隆得到。 2V6.11細(xì)胞誘導(dǎo)表達(dá)的人腺病毒E4 34KDa蛋白可通過(guò)免疫印跡法檢測(cè)。 這株細(xì)胞可以用作研究腺病毒E4癌基因的工具 
培養(yǎng)條件       MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
傳代方法       消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況      PN5
凍存條件       基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè)      陰性
STR      
同工酶      
染色體      
使用權(quán)限      A類 
人胚腎細(xì)胞;2V6.11操作步驟細(xì)胞培養(yǎng)
1、冷凍管應(yīng)如何解凍?
取出冷凍管后, 須立即放入37 ℃水槽中快速解凍, 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化, 并注意水面不可超過(guò)冷凍管蓋沿, 否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí), 必須注意安全, 預(yù)防冷凍管之爆裂。
2、細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí), 是否應(yīng)馬上去除DMSO?
除少數(shù)特別注明對(duì)DMSO 敏感之細(xì)胞外, 絕大部分細(xì)胞株(包括懸浮性細(xì)胞), 在解凍之后, 應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中, 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可, 如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)或貼附之問(wèn)題。
3、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?
不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基, 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基, 細(xì)胞大都無(wú)法立即適應(yīng), 造成細(xì)胞無(wú)法存活。
4、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?
不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源, 所以血清的種類和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來(lái)自不同物種的血清, 在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無(wú)法存活。
人胚腎細(xì)胞;2V6.11操作步驟復(fù)蘇操作要點(diǎn):
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過(guò)Z易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
公司細(xì)胞庫(kù)細(xì)胞株種類齊全:大鼠腹水癌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、耐藥細(xì)胞株,如:人滑膜細(xì)胞,人胃癌細(xì)胞,人細(xì)胞,人腎近曲小管上皮細(xì)胞,肝癌細(xì)胞,心肌細(xì)胞,子宮內(nèi)膜細(xì)胞等。細(xì)胞狀態(tài)良好,飽滿,光澤度好,*,專業(yè)技術(shù)指導(dǎo),另有細(xì)胞培養(yǎng)類產(chǎn)品胎牛血清、小牛血清、DMSO、雙抗、胰酶、DMEM、1640培養(yǎng)基、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等產(chǎn)品。歡迎廣大科研用戶
纖維膠凝蛋白3(FCN3)ELISA試劑盒    ,英文名:    FCN3 ELISA Kit
纖維蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA試劑盒    ,英文名:    FDP ELISA Kit
纖維蛋白原α鏈(FGA)ELISA試劑盒    ,英文名:    FGA ELISA Kit
纖維蛋白原(Fb)ELISA試劑盒    ,英文名:    Fb ELISA Kit
纖維蛋白溶酶(PL/Fbn)ELISA試劑盒    ,英文名:    PL/Fbn ELISA Kit
纖維蛋白(Fibrin)ELISA試劑盒    ,英文名:    Fibrin ELISA Kit
纖調(diào)蛋白(FMOD)ELISA試劑盒    ,英文名:    FMOD ELISA Kit
纖溶抑制因子/凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)ELISA試劑盒    ,英文名:    TAFI ELISA Kit
細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子1(SOCS-1)ELISA試劑盒    ,英文名:    SOCS-1 ELISA Kit
細(xì)胞纖維連接蛋白(cFn)ELISA試劑盒    ,英文名:    cFn ELISA Kit
細(xì)胞外基質(zhì)磷酸糖蛋白(MEPE)ELISA試劑盒    ,英文名:    MEPE ELISA Kit
細(xì)胞色素P450c21B/21-羥化酶(CYP21B)ELISA試劑盒    ,英文名:    CYP21B ELISA Kit
細(xì)胞色素P450c21A/21-羥化酶(CYP21A)ELISA試劑盒    ,英文名:    CYP21A ELISA Kit

保亭哥納香Goniothalamus griffithii    9-Deoxygoniopypyrone    9-脫氧基哥納香吡喃酮    136685-37-5    C13H14O4    ≥95%
保亭哥納香Goniothalamus griffithii    Goniodiol    哥納香二醇    96422-52-5    C13H14O4    ≥95%
保亭哥納香Goniothalamus griffithii    Goniodiol 7-acetate    7-乙酸房角二醇酯    96422-53-6    C15H16O5    ≥95%
保亭哥納香Goniothalamus griffithii    Goniodiol 8-acetate    8-乙酸哥納香二醇酯    144429-71-0    C15H16O5    ≥95%
保亭哥納香Goniothalamus griffithii    Goniopypyrone    3,7-脫水-2-脫氧基-7-C-苯基-D-葡庚糖酸 DELTA-內(nèi)酯    129578-07-0    C13H14O5    ≥95%
保亭哥納香Goniothalamus griffithii    Goniothalamin    (6R)-(+)-5,6-二氫-6-苯乙烯基-2-吡喃酮    17303-67-2    C13H12O2    ≥98.5%
保亭哥納香Goniothalamus griffithii    Goniotriol    哥納香三醇    96405-62-8    C13H14O5    ≥95%
人胚腎細(xì)胞;2V6.11操作步驟保亭哥納香Goniothalamus griffithii    Griffithazanone A    (3R,4R)-3,4-二氫-3-羥基-4-甲基苯并[G]喹啉-2,5,10(1H)-三酮    240122-30-9    C14H11NO4    ≥95%
保亭哥納香Goniothalamus griffithii    Griffithinam    1-羥基-2,7-二甲氧基二苯并[CD,F]吲哚-4(5H)-酮    240122-32-1    C17H13NO4    ≥95%

 

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