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人結(jié)直腸癌細(xì)胞;DiFi操作步驟

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更新時(shí)間:2017-05-17 20:16:56瀏覽次數(shù):178次

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細(xì)胞名稱     人結(jié)直腸癌細(xì)胞;DiFi操作步驟
形態(tài)特性      上皮樣
生長(zhǎng)特性     貼壁生長(zhǎng)
特征特性       
培養(yǎng)條件      DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10% FBS
傳代方法     
傳代情況     
凍存條件      基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè)     培養(yǎng)法(-)
STR      Amelogenin:X;CSF1PO:10,11;D13S317:8,11;D16S539:12;D18S51:13;D21S11:32;D3S1358:17,18;D5S818:11,12;D7S820:10,12;D8S1179:12;FGA:23,27;PentaD:12;PentaE:12,18;TH01:7,9.3;TPOX:8,9;vWA:17,18
同工酶     
染色體     
使用權(quán)限     B類
人結(jié)直腸癌細(xì)胞;DiFi操作步驟細(xì)胞培養(yǎng)
1、冷凍管應(yīng)如何解凍?
取出冷凍管后, 須立即放入37 ℃水槽中快速解凍, 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化, 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿, 否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí), 必須注意安全, 預(yù)防冷凍管之爆裂。
2、細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí), 是否應(yīng)馬上去除DMSO?
除少數(shù)特別注明對(duì)DMSO 敏感之細(xì)胞外, 絕大部分細(xì)胞株(包括懸浮性細(xì)胞), 在解凍之后, 應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中, 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可, 如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無法生長(zhǎng)或貼附之問題。
3、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?
不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基, 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基, 細(xì)胞大都無法立即適應(yīng), 造成細(xì)胞無法存活。
4、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?
不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來源, 所以血清的種類和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清, 在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無法存活。
人結(jié)直腸癌細(xì)胞;DiFi操作步驟復(fù)蘇操作要點(diǎn):
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過Z易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
公司細(xì)胞庫細(xì)胞株種類齊全:大鼠腹水癌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、耐藥細(xì)胞株,如:人滑膜細(xì)胞,人胃癌細(xì)胞,人細(xì)胞,人腎近曲小管上皮細(xì)胞,肝癌細(xì)胞,心肌細(xì)胞,子宮內(nèi)膜細(xì)胞等。細(xì)胞狀態(tài)良好,飽滿,光澤度好,*,專業(yè)技術(shù)指導(dǎo),另有細(xì)胞培養(yǎng)類產(chǎn)品胎牛血清、小牛血清、DMSO、雙抗、胰酶、DMEM、1640培養(yǎng)基、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等產(chǎn)品。歡迎廣大科研用戶!
無翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員5B(WNT5B)ELISA試劑盒    ,英文名:    WNT5B ELISA Kit
無翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員5A(WNT5A)ELISA試劑盒    ,英文名:    WNT5A ELISA Kit
無翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員4(WNT4)ELISA試劑盒    ,英文名:    WNT4 ELISA Kit
無翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員3A(WNT3A)ELISA試劑盒    ,英文名:    WNT3A ELISA Kit
無翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員3(WNT3)ELISA試劑盒    ,英文名:    WNT3 ELISA Kit
無翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員2(WNT2)ELISA試劑盒    ,英文名:    WNT2 ELISA Kit
無翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員11(WNT11)ELISA試劑盒    ,英文名:    WNT11 ELISA Kit
無翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員10B(WNT10B)ELISA試劑盒    ,英文名:    WNT10B ELISA Kit
無翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員10A(WNT10A)ELISA試劑盒    ,英文名:    WNT10A ELISA Kit
無翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員1(WNT1)ELISA試劑盒    ,英文名:    WNT1 ELISA Kit
無孢蛋白(ASPN)ELISA試劑盒    ,英文名:    ASPN ELISA Kit
蝸管蛋白(COIL)ELISA試劑盒    ,英文名:    COIL ELISA Kit
穩(wěn)定素2(STAB2)ELISA試劑盒    ,英文名:    STAB2 ELISA Kit

人鳥苷酸結(jié)合蛋白4(Gbp4)免疫試劑盒    human Gbp4 ELISA Kit
人鳥苷酸交換因子(GEF)免疫試劑盒    Human Guanine Exchange Factor,GEF ELISA Kit
人鳥氨酸脫羧酶(ODC)免疫試劑盒    Human Ornithine decarboxylase,ODC ELISA Kit
人黏著斑激酶(FAK)免疫試劑盒    Human focal adhesion kinase,FAK ELISA Kit
人黏膜地址素細(xì)胞黏附分子(MAdCAM-1)免疫試劑盒    Human mucosal addressin cell adhesion molecule-1,MAdCAM-1 ELISA Kit
人黏多糖/糖胺聚糖免疫試劑盒    Human glycosaminoglycan/mucopolysaccharide ELISA Kit
人腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)免疫試劑盒    Human brain natriuretic peptide,BNP ELISA Kit
人腦啡肽(ENK)免疫試劑盒    Human enkephalin,ENK ELISA Kit
人腦腸肽(BGP/Gehrelin)免疫試劑盒    Human brain-gut peptides,BGP/Gehrelin Elisa kit
人囊蟲病抗體(CYT Ab)免疫試劑盒    Human Cysticercosis antybody,CYT Ab ELISA Kit
人難辨梭狀芽孢桿菌毒素B(TOXB)免疫試劑盒    Human clostridium difficile Toxin B,TOXB ELISA kit
人難辨梭狀芽孢桿菌毒素A(TOXA)免疫試劑盒    Human clostridium difficile Toxin A,TOXA ELISA kit
人結(jié)直腸癌細(xì)胞;DiFi操作步驟人鈉-氯化物依賴性牛磺酸轉(zhuǎn)運(yùn)體(SLC6A6/TAUT)免疫試劑盒    Human SLC6A6 ELISA Kit
人鈉離子通道蛋白抗體免疫試劑盒    Human Voltage Gated Sodium Channels Antibody ELISA Kit
人內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白29(ERP29/C12orf8/ERP28)免疫試劑盒    Human ERP29/C12orf8/ERP28 ELISA kit

 

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