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PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。
其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?/span>5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
具有下列特點(diǎn):
1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品名稱 | MOPSO Buffer |
規(guī)格 | 詳見說明 |
貨號 | CP100639 |
特點(diǎn)優(yōu)勢:
1. 特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時,可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?/span>4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
大觀霉素殘留檢測試紙條Benzyl 4-Oxo-piperidinecarboxylate19934-氧代-羧酸芐酯
卡那霉素殘留檢測試紙條Benzyl 4-hydroxybenzoate9484-羥基苯甲酸芐酯
M1殘留檢測試紙條Benzyl 4-bromophenyl ketone019芐基4-溴代苯基酮
鏈霉素和雙氫鏈霉素殘留檢測試紙條Benzyl 2-aminoacetate p-sulfonate17386
紅霉素殘留檢測試紙條Benzyl 2,4-dihydroxyphenyl ketone366912,4-二羥基苯基芐酮
小鼠酪蛋白酶ELISA試劑盒 Ethyl glucoside 3198-49-0 中文名:乙基葡萄糖苷 分子式:C8H16O6
小鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子elisa試劑盒 小鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 小鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子試劑盒、小鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。 Bromhexine 中文名:鹽酸溴己新 分子式:C14H21Br2ClN2
小鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)ELISA試劑盒 Makisterone A 20,22-monoacetonide 245323-24-4 中文名: 分子式:C31H50O7 度:% 關(guān)鍵詞:
小鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)ELISAKit Ethyl rutinoside 中文名:蕓香糖乙苷 分子式:C14H26O10
小鼠可溶性細(xì)胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA試劑盒 Makisterone A 20,22-monoacetonide 245323-24-4 中文名: 分子式:C31H50O7
MOPSO Buffer鹽酸番茄堿 HPLC≥98% 20mg 小鼠細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子1(SOCS-1)ELISA試劑盒 ,英文名: SOCS-1 ELISA Kit
表戈米辛O HPLC≥98% 20mg 小鼠可溶性肌球蛋白重鏈2(sMHC-2)Elisa檢測試劑盒Mousesolublemyosinheavychain2,sMHC-2ELISAKit 96T/48T
異鼠李素O槐二糖O鼠李糖苷 HPLC≥95% 20mg 人核因子κB抑制物激酶β(IKK-β)試劑盒 Human IKK-β ELISA kit
山柰酚槐二糖鼠李糖苷 HPLC≥95% 20mg RatcytochromeP4502E1,CYP2E1ELISAKit大鼠細(xì)胞色素P4502E1(CYP2E1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
槲皮素O葡萄糖O鼠李糖苷 HPLC≥98% 20mg 3′端DNA生物素轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記鑒定試劑盒10
異鼠李素O葡萄糖O鼠李糖苷 HPLC≥95% 20mg MouseD-LactateDehydrogenase,D-LDHELISA試劑盒小鼠D-乳酸脫氫酶(D-LDH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
靈芝酸I HPLC≥98% 20mg 小鼠細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶2(ERK2)ELISA試劑盒 ,英文名: ERK2 ELISA Kit
黃卡瓦胡椒素C HPLC≥95% 20mg 兔血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)ELISA檢測試劑盒RabbitVascularEndothelialcellGrowthFactor,VEGFELISAKit 96T/48T
β靈芝酸M HPLC≥95% 20mg 牛亞硫酸鹽氧化酶(sulfite oxidase,SO)試劑盒 Bovine Sulfite Oxidase(sulfite oxidase,SO)ELISA Kit
靈芝內(nèi)酯B HPLC≥98% 20mg 英文名稱HumansVCAM-1ELISAKit人可溶性血管細(xì)胞粘附分子(sVCAM-1)規(guī)格:96T/48T
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