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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>PCR檢測試劑盒>>熒光PCR法>> 50T水痘-帶狀皰疹病毒熒光PCR法檢測試劑盒
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。
其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?/span>5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
具有下列特點(diǎn):
1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對(duì)照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品名稱 | 水痘-帶狀皰疹病毒熒光PCR法檢測試劑盒 |
規(guī)格 | 50T |
貨號(hào) | CP99645 |
特點(diǎn)優(yōu)勢:
1. 特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
107667-60-7 Polaprezinc (Zinc L-carnosine) 50mg Histoplasma capsulatum莢膜組織胞漿菌LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
107668-79-1 Bulleyaconitine A 10mg Histoplasm farcinimosum馬皮疽組織胞漿菌LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
107668-79-1 Bulleyaconitine A 50mg Histoplasm farcinimosum馬皮疽組織胞漿菌LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
107703-78-6 MDL 11,939 1mg Histoplasm spp.組織胞漿菌通用LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
107703-78-6 MDL 11,939 5mg Histoplasm spp.組織胞漿菌通用LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
鹽酸羥嗪(標(biāo)準(zhǔn)品)Hydroxyzine di質(zhì)量規(guī)格:含量測定 人軍團(tuán)菌抗體IgG(LP Ab-IgG)試劑盒 Human Legionella aibody IgG,LP Ab-IgG ELISA Kit 人細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶2(ERK2)Elisa試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
金諾芬(標(biāo)準(zhǔn)品)Auranofin質(zhì)量規(guī)格:含量測定 RatactivatedproteinC,APCELISAKit大鼠活化蛋白C(APC)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 豬肌紅蛋白(MB)試劑盒 Pig Myoglobin,MB ELISA kit
依普利酮醇酸鉀鹽 Eplerenone Hydroxyacid Potassium Salt質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口 載玻片細(xì)胞RyR受體蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20 HumaegulatedonactivationinnormalT-cellexpressedandsecreted,RAESELISAkit 人正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(RAES/CCL5)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
4-氧度酸4-Oxo Etodolac質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口 Mouse15-lipoxygenase,15-LO/LOXELISA試劑盒小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T Humanmyelinbasicproteinaoaibody,MBPELISA試劑盒人髓鞘堿性蛋白抗體(MBP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
水痘-帶狀皰疹病毒熒光PCR法檢測試劑盒III型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL1,3-雙(4-氨苯氧基)苯(>98.0%(GC)(T))1,3-Bis(4-aminophenoxy)benzene質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)(T)
NCI-N87 [N87]人胃癌細(xì)胞 NCI-N87 human gasic cancer cells [N87] RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS4-氨基-4'-氯二苯(>97.0%(GC)(T))4-Amino-4'-chlorodiphenyl Ether質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(GC)(T)
IL2 Protein Canine 重組狗 Ierleukin-2 / IL-2 蛋白 (147 Cys/Ser)1,4,8,12-四氮雜環(huán)十五烷(>97.0%(T))1,4,8,12-Tetraazacyclopentadecane質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(T)
人外殼細(xì)胞(HHorSC)( 5×105 ) CSC, 小鼠心肌細(xì)胞 Mouse1,5,9-三氮雜環(huán)十二烷(>90.0%(GC))1,5,9-Triazacyclododecane質(zhì)量規(guī)格:>90.0%(GC)
非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-E1;Vero-HCV-E11,4,7-三氮雜環(huán)壬烷(>98.0%(GC))1,4,7-Triazacyclononane質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
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