當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>PCR檢測試劑盒>>熒光PCR法>> 50T鼠疫桿菌熒光PCR法檢測試劑盒
PCR實驗步驟:
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴增。
其主要步驟是:
將待擴增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合,兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因為模板從5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補鏈。
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具有下列特點:
1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照,便于分析試驗結(jié)果。
產(chǎn)品名稱 | 鼠疫桿菌熒光PCR法檢測試劑盒 |
規(guī)格 | 50T |
貨號 | CP99543 |
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
熒光定量PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
108612-45-9 Mizolastine 50mg Severe Fever with Thrombocytopenia Syndrome Bunyavirus(SFTSV)發(fā)熱伴血小板減少綜合征布尼亞病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度
108-62-3 Metaldehyde 5g Severe Fever with Thrombocytopenia Syndrome Bunyavirus(SFTSV)發(fā)熱伴血小板減少綜合征布尼亞病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度
108646-71-5 Ac-Met(O)-OH 1g Gasterophilus spp.馬虻LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度
108646-71-5 Ac-Met(O)-OH 5g Gasterophilus spp.馬虻LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度
108648-07-3 Purpureaside C 10mg Wesselsbron Virus韋塞爾斯布朗病毒LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度
鹽酸多柔比星/鹽酸阿霉素Doxorubicin HCl/Adriamycin質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 犬結(jié)締組織生長因子(CTGF)試劑盒 Canine connective tissue growth factor,CTGF ELISA Kit 人唾液酸(SA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
鹽酸多柔比星/鹽酸阿霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)Doxorubicin HCl/Adriamycin質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱HumahrombomodulinELISAKit人血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 豬雌二醇受體(ER)試劑盒 Porcine Esadiol receptor ELISA Kit
鹽酸多沙普侖Doxapram 質(zhì)量規(guī)格:美國進口 化線粒體凍存液(酶學(xué)和膜結(jié)構(gòu)保護)50毫升 HumanGranulocyte-MacrophageColonyStimulatingFactor,GM-CSFELISAKit 人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
琥珀酸多西拉敏-d5Doxylamine-d5 Succinate質(zhì)量規(guī)格:美國進口 RatInsulin-likegrowthfactor2,IGF-2ELISA試劑盒大鼠胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T Humanoctameranscriptionfactor2B,OTF2BELISA試劑盒人八聚體轉(zhuǎn)錄因子(OTF2B)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
鼠疫桿菌熒光PCR法檢測試劑盒HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) 司他夫定質(zhì)量規(guī)格:>98,BR,可用于細胞培養(yǎng)Stavudine
T-103AI型膠原酶(含10mL酶解緩沖液)1mL司他夫定(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:>98,標(biāo)準(zhǔn)品Stavudine
TU 686細胞,人喉癌細胞 人臍靜脈內(nèi)皮細胞,ECV-304細胞 中國倉鼠卵巢細胞-二氫葉酸還原酶缺陷型;CHO/dhFr-鹽酸四環(huán)素(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Tetracycline
C-33 A(人子細胞) 5×106cells/瓶×2/羧芐西林鈉質(zhì)量規(guī)格:>90%,BRCarbenicillin di
CNDP1 Others Human 人 CNDP1 人細胞裂解液 (陽性對照) 羧芐西林鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定,標(biāo)準(zhǔn)品Carbenicillin di
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