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上海莼試生物技術有限公司
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大鼠角膜組織提取物說明

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具體成交價以合同協(xié)議為準

產品型號T25m2

品       牌

廠商性質經銷商

所  在  地上海市

更新時間:2021-06-22 10:02:02瀏覽次數(shù):173次

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大鼠角膜組織提取物說明收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞后轉入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。

大鼠角膜組織提取物【Eye: Normal Rat Corneal Derivatives】角膜組織是是位于眼球前壁的一層透明膜,為眼睛提供大部分屈光力。公司科技提供來自新鮮或冷凍大鼠角膜組織中高質量的總RNAPCR準備的第一條cDNA鏈,蛋白質及其亞組分。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

RNA制備:利用Qiagen RNeasy KitTrizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mgRNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證了產品的質量。

蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF-80度保存。

潛在的應用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。

產品名稱

大鼠角膜組織提取物說明

規(guī)格

T25m2

貨號

CS-964363

實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法; 
2
.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃制造,并經過鉻酸洗液處理; 
3
.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 
4
.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率; 
5
.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4放置;
3、剩下的組織再加入34mL酶消化液,混懸10s,置37消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10 FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37 5CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4條件下,用0.1Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37條件下放置1h
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項:
1.接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37,5%CO2培養(yǎng)。
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110657-98-2  Lipoxin A5  25&#956;g  Erysipelothrix rhusiopathiae紅斑丹毒絲菌(豬丹毒桿菌)LAMP試劑盒 

110657-98-2  Lipoxin A5  50&#956;g  Erysipelothrix spp丹毒絲菌屬通用LAMP試劑盒 

110683-10-8  N-(p-amylcinnamoyl) Anthranilic Acid  100mg  Truperella pyogenes化膿隱秘菌LAMP試劑盒 

110683-10-8  N-(p-amylcinnamoyl) Anthranilic Acid  250mg  Truperella pyogenes化膿隱秘菌LAMP試劑盒
小鼠源細胞右旋延胡索乙素(標準品)D-Tetrahydropalmatine質量規(guī)格:HPLC98%,標準品

HA Others H7N7 甲型流感 H7N7 (A/chicken/Netherlands/1/03) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 細胞裂解液 (陽性對照) 對溴芐胺 4-Bromobenzylamine質量規(guī)格:>98%

狗腎惡性組織細胞增生癥細胞;DH822-O-沒食子酰基金絲桃苷(標準品)2-O-Galloylhyperin質量規(guī)格:HPLC98%,標準品

COL4A3 Others Rat 大鼠 COL4A3 細胞裂解液 (陽性對照) 1,2,3,4,6-O-沒食子酰葡萄糖(標準品)1,2,3,4,6-O-pentagalloylglucose質量規(guī)格:HPLC98%,標準品

皮下脂肪細胞Many types of cells包裝:5 × 105(1ml)蒙花苷(標準品)Buddleoside質量規(guī)格:HPLC98%,標準品
大鼠角膜組織提取物說明MelanoFectagen? 色素細胞轉染試劑盒普盧利沙星;普利沙星質量規(guī)格:>99%,BRPrulifloxacin

牛腎細胞;MDBK(NBL-1) 胃癌細胞,NCI-N87細胞 NS-1細胞,小鼠骨髓瘤細胞普盧利沙星;普利沙星(標準品)質量規(guī)格:HPLC>98%,標準品Prulifloxacin

EB病毒轉化的B細胞(彝族);KM9345-HIAA;5-羥基吲哚-3-乙酸(血清素代謝物)質量規(guī)格:>98.0%,進分5-HIAA

SLAMF7 Others Human  SLAMF7 / CRACC / CD319 細胞裂解液 (陽性對照) 頭孢地嗪酸;頭孢地嗪酸質量規(guī)格:>90%,BRCefodizime acid

CL-0080WB-F344(大鼠肝上皮樣干細胞)5×106cells/瓶×2右美沙芬-d3質量規(guī)格:美國進口Dextromethorphan-d3

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